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尺寸排阻色譜柱是一種廣泛應(yīng)用于生物分析領(lǐng)域的工具，其工作原理主要基于分子大小差異進行分離。利用柱內(nèi)固定相中孔隙與分子間的物理作用來實現(xiàn)分離。具體來說，聚合物分子在柱子中的孔道中被篩選，較大的分子無法通過尺寸較小的孔道，只有較小的分子才能通過這些孔道，從而實現(xiàn)不同分子尺寸的分離。其優(yōu)點在于其分離速度快、操作簡單、分離效果好。此外，該技術(shù)不依賴于分子之間的親和性或化學(xué)性質(zhì)，因此適用于各種生物大分子，如蛋白質(zhì)、多肽和核酸等的分離。
尺寸排阻色譜柱的清洗步驟
1、判斷清洗時機：隨著使用時間或進樣次數(shù)的增加，出現(xiàn)柱效下降無法達到分離要求，或伴有峰型拖尾、分叉等情況時，就需要清洗色譜柱。
2、反向連接與沖洗：建議清洗過程中將色譜柱與檢測器斷開連接，防止流通池污染。反向連接色譜柱，并以最大流速的1/2運行色譜柱。
3、具體清洗流程：使用5倍柱體積（CV）的pH3.0、0.5mol/L Na?SO?水溶液沖洗色譜柱；使用5CV的Milli-Q或去離子水沖洗；使用5CV的20%乙腈清洗；再使用5CV的Milli-Q或去離子水沖洗。
4、正向連接與平衡：清洗完成后，再正向連接色譜柱，并以樣品分析時的流速使用至少10CV的流動相來平衡色譜柱，應(yīng)逐漸提高流速，以免損壞色譜柱。
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