ELISA實(shí)驗(yàn)中標(biāo)曲和樣本的顯色問(wèn)題

　　以下是天津本生ELISA實(shí)驗(yàn)中關(guān)于 ?標(biāo)曲和樣本顯色問(wèn)題? 的常見(jiàn)原因及解決方案，綜合多篇文獻(xiàn)分析整理：

　　一、標(biāo)曲不顯色或顯色弱，樣本正常

　　標(biāo)準(zhǔn)品溶解不充分?

　　溶解時(shí)未渦旋震蕩，導(dǎo)致標(biāo)準(zhǔn)品未溶解或稀釋不均。

　　解決?：使用渦旋震蕩器充分混勻標(biāo)準(zhǔn)品及稀釋液。

　　孵育條件不當(dāng)?

　　靜置孵育導(dǎo)致抗原抗體接觸不充分，建議使用微孔板振蕩器(37℃)。

　　試劑漏加或失效?

　　可能漏加檢測(cè)抗體、酶標(biāo)試劑，或試劑因反復(fù)凍融失活。

　　解決?：分裝保存試劑，操作時(shí)標(biāo)記步驟避免遺漏。

　　二、標(biāo)曲和樣本均不顯色

　　系統(tǒng)性問(wèn)題?

　　酶標(biāo)試劑(如HRP)失活、底物(TMB)污染或過(guò)期。

　　解決?：更換新鮮底物，檢查試劑保存條件(避光、防潮)。

　　操作失誤?

　　未按說(shuō)明書(shū)步驟操作(如漏加關(guān)鍵組分)。

　　解決?：嚴(yán)格遵循操作流程，新手建議使用帶染料的試劑盒輔助驗(yàn)證。

　　三、標(biāo)曲顯色正常，樣本不顯色

　　樣本濃度過(guò)低?

　　目標(biāo)蛋白濃度低于檢測(cè)限，或樣本類(lèi)型(如血漿、細(xì)胞上清)不匹配。

　　解決?：嘗試高敏ELISA試劑盒或濃縮樣本。

　　樣本干擾物質(zhì)?

　　溶血、細(xì)菌污染、類(lèi)風(fēng)濕因子等導(dǎo)致假陰性。

　　解決?：離心去除雜質(zhì)，添加蛋白酶抑制劑或稀釋樣本。

　　四、顯色過(guò)強(qiáng)或無(wú)梯度

　　洗滌不凈

　　殘留HRP酶催化底物過(guò)度顯色，尤其是TMB前最后一次洗滌。

　　解決?：確保洗液注滿孔，拍干液體，手動(dòng)洗板時(shí)更換吸水紙。

　　底物孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)?

　　TMB顯色超過(guò)15分鐘可能導(dǎo)致OD值飽和。

　　解決?：顯色10-15分鐘后及時(shí)終止(最高濃度孔出現(xiàn)深藍(lán)色即可)。

　　五、其他注意事項(xiàng)

　　移液精度?：定期校準(zhǔn)移液器，避免加樣誤差。

　　環(huán)境控制?：避免底物(TMB)提前氧化(如避光保存)。

　　對(duì)照設(shè)置?：陰陽(yáng)性對(duì)照可幫助區(qū)分系統(tǒng)誤差與樣本問(wèn)題。

　　通過(guò)規(guī)范操作和針對(duì)性排查，可顯著改善顯色異常問(wèn)題。

　　注：以上資料僅供參考，不作為實(shí)驗(yàn)依據(jù)，具體請(qǐng)咨詢技術(shù)老師或產(chǎn)品品牌供應(yīng)商。

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