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可見分光光度計(jì)是分析化學(xué)和生物實(shí)驗(yàn)中常用的精密儀器，用于測定溶液中物質(zhì)的光吸收特性，從而推導(dǎo)濃度或化學(xué)性質(zhì)。其核心原理基于朗伯-比爾定律(A = εlc)，即吸光度與溶液濃度、光程長度及摩爾吸光系數(shù)成正比。為確保測量準(zhǔn)確性和儀器穩(wěn)定性，需嚴(yán)格遵循以下操作細(xì)節(jié)：
一、前期準(zhǔn)備與儀器檢查
1. 環(huán)境要求
- 儀器需放置在平穩(wěn)臺面，避免震動和強(qiáng)光直射。
- 室溫應(yīng)保持恒定(20-25℃)，濕度控制在40%-60%，防止光學(xué)元件受潮或結(jié)露。
- 電源電壓需穩(wěn)定，建議配備穩(wěn)壓電源或UPS，避免電壓波動影響檢測器靈敏度。
2. 儀器自檢
- 開機(jī)前檢查樣品室是否清潔，無殘留液體或灰塵。
- 確認(rèn)氘燈(或鎢燈)壽命，若光源強(qiáng)度不足(如透光率偏差>10%)，需及時更換。
- 檢查波長校準(zhǔn)：用汞燈或鈥玻璃濾光片校正波長準(zhǔn)確性(允許誤差±1 nm)。
二、操作流程與關(guān)鍵步驟
1. 開機(jī)預(yù)熱與初始化
- 開啟電源后預(yù)熱15-30分鐘，使光源、單色器及檢測器達(dá)到熱平衡。
- 初始化儀器：選擇可見光波段(380-780 nm)，設(shè)置掃描模式或固定波長模式。
2. 參比溶液的制備與校準(zhǔn)
- 參比液選擇：通常為溶劑(如蒸餾水、緩沖液)，需與待測樣品基質(zhì)一致。
- 校準(zhǔn)操作：
- 將參比液倒入1 cm比色皿，用擦鏡紙擦拭外壁至透明。
- 放入樣品室，關(guān)閉蓋板，調(diào)零透光率(T%=100%)或吸光度(A=0)。
- 若測量波長超出參比液適用范圍(如色素干擾)，需采用空氣校準(zhǔn)或二次參比法。
3. 樣品測量與數(shù)據(jù)記錄
- 比色皿使用規(guī)范：
- 選擇匹配的石英或玻璃比色皿(光學(xué)面潔凈，無劃痕)。
- 倒入樣品時沿壁緩慢添加，避免產(chǎn)生氣泡；若有氣泡，用軟紙巾輕拭排出。
- 測量高濃度樣品時，可稀釋后測試，防止吸光度超出線性范圍(A=0.2-1.0為佳)。
- 數(shù)據(jù)讀取：
- 固定波長下直接讀取吸光度(A)或透光率(T%)，連續(xù)測量3次取平均值。
- 若需全波長掃描，設(shè)置適當(dāng)狹縫寬度(通常1-2 nm)，觀察特征吸收峰位置。
4. 數(shù)據(jù)處理與分析
- 標(biāo)準(zhǔn)曲線法：配制系列濃度標(biāo)準(zhǔn)品，繪制A-C標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品濃度。
- 差值法：用于復(fù)雜樣品，通過參比液與樣品的吸光度差值定量。
- 記錄內(nèi)容：波長、吸光度、參比液信息、測量時間及環(huán)境條件。
三、注意事項(xiàng)與常見問題
1. 避免污染與誤差
- 勿用手觸摸比色皿光學(xué)面，指紋可用鏡頭紙蘸乙醇擦拭。
- 測量揮發(fā)性樣品時，動作迅速并加蓋比色皿，防止溶劑蒸發(fā)導(dǎo)致濃度變化。
- 同一組實(shí)驗(yàn)中，參比液與樣品液的測量順序需交替進(jìn)行，減少系統(tǒng)誤差。
2. 光源維護(hù)
- 氘燈或鎢燈連續(xù)使用不超過4小時，避免過熱損壞。
- 關(guān)閉樣品室蓋后再調(diào)整參數(shù)，防止外界光線干擾。
3. 故障排查
- 噪聲大：檢查電源穩(wěn)定性，清潔檢測器窗口。
- 基線漂移：重新校準(zhǔn)參比液，確認(rèn)波長準(zhǔn)確性。
- 吸光度異常：檢查比色皿是否匹配，樣品是否有沉淀或渾濁。
四、儀器維護(hù)與保養(yǎng)
1. 日常維護(hù)
- 測量結(jié)束后用蒸餾水沖洗比色皿，晾干后存放。
- 清潔樣品室，用防塵罩覆蓋儀器，定期更換干燥劑。
- 每月檢查波長精度，必要時聯(lián)系廠家校準(zhǔn)。
2. 長期停用
- 切斷電源，取出比色皿，在樣品室放置干燥劑。
- 記錄儀器使用日志，包括運(yùn)行時間、維修記錄及耗材更換情況。
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