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無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)后零處理進(jìn)行BLI(Biolayer Interferometry)
近日，珀羅汀生物收到某藥企研發(fā)團(tuán)隊(duì)的反饋：使用兩款PLD無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)試劑（PLDK001、PLDK002），成功實(shí)現(xiàn)3個(gè)蛋白的高效表達(dá)，并通過BLI檢測(cè)無(wú)細(xì)胞反應(yīng)后上清快速完成了功能性驗(yàn)證！
生物層干涉術(shù)（Biolayer Interferometry, BLI）是一種非標(biāo)記的、實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)的先進(jìn)技術(shù)，主要用于生物分子間或是生物分子與小分子間相互作用分析。在蛋白與配體的相互作用檢測(cè)時(shí)，基于傳統(tǒng)細(xì)胞表達(dá)的蛋白樣品通常需要經(jīng)過復(fù)雜的細(xì)胞破碎、純化等前處理。然而在本案例中，通過無(wú)細(xì)胞表達(dá)技術(shù)獲得的重組蛋白，實(shí)現(xiàn)了上清液零處理直接BLI檢測(cè)！
圖1 ：基于傳統(tǒng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)的BLI檢測(cè)與本案例基于無(wú)細(xì)胞表達(dá)（CFPS）的BLI檢測(cè)流程對(duì)比示意圖
本案例實(shí)驗(yàn)結(jié)果可謂亮點(diǎn)紛呈
1.高可溶表達(dá)：SDS-PAGE清晰顯示，3個(gè)蛋白在無(wú)細(xì)胞表達(dá)上清液中均呈現(xiàn)強(qiáng)目的條帶（圖1），傳統(tǒng)大腸桿菌系統(tǒng)中易形成的包涵體難題被破解！
圖2： 三個(gè)蛋白在PLDK001、PLDK002試劑盒中表達(dá)的SDS-PAGE膠圖
2.低背景：蛋白3經(jīng)BLI（生物膜層干涉技術(shù)）檢測(cè)顯示：帶His標(biāo)簽的目的蛋白與背景信號(hào)區(qū)分度高（圖3），表明表達(dá)產(chǎn)物背景干擾小，無(wú)需復(fù)雜純化即可直接用于下游結(jié)合實(shí)驗(yàn)。
圖3：BLI通過抗His捕獲傳感器可從表達(dá)上清中捕獲蛋白3
3.強(qiáng)親和活性：最令人振奮的是——蛋白2與其配體蛋白的BLI實(shí)時(shí)結(jié)合曲線顯示典型高效結(jié)合特征，表明該蛋白具有強(qiáng)親和活性！這種無(wú)細(xì)胞快速表達(dá)+BLI快速檢測(cè)親和活性的方案，將為藥物靶點(diǎn)蛋白篩選貢獻(xiàn)新速度。
圖4：蛋白2與其配體蛋白有強(qiáng)親和活性
無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)：推動(dòng)靶點(diǎn)蛋白開發(fā)的“高能引擎”
從基因到蛋白，再到活性驗(yàn)證， 珀羅汀無(wú)細(xì)胞蛋白表達(dá)技術(shù)猶如“高能引擎”，推動(dòng)靶點(diǎn)蛋白極速表達(dá)，為藥物發(fā)現(xiàn)提供“無(wú)細(xì)胞速度”。對(duì)于分秒必爭(zhēng)的新藥研發(fā)，速度即是壁壘，活性就是王-道！此次客戶的成功實(shí)踐，驗(yàn)證了珀羅汀無(wú)細(xì)胞表達(dá)平臺(tái)的三重價(jià)值：
√ 打破表達(dá)壁壘——高難度蛋白輕松可溶表達(dá)；
√ 跳過純化瓶頸——表達(dá)上清直通活性檢測(cè)；
√ 壓縮研發(fā)周期——將傳統(tǒng)數(shù)周流程縮短至數(shù)天！
對(duì)比傳統(tǒng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)，珀羅汀無(wú)細(xì)胞技術(shù)在此次案例中展現(xiàn)出壓倒性優(yōu)勢(shì)：
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