CF488A Tyramide屬于熒光素衍生物,具有較高的亮度和光穩(wěn)定性
CF488A Tyramide 是一種綠色熒光探針,由熒光基團(tuán)CF488A與酪胺基團(tuán)通過酰胺鍵連接而成。
熒光基團(tuán)(CF488A):屬于熒光素衍生物,具有較高的亮度和光穩(wěn)定性。
酪胺基團(tuán):含有苯環(huán)羥基(-OH)和乙氨基(-NH?),在辣根過氧化物酶(HRP)催化下可被氧化為自由基,并與目標(biāo)蛋白附近的酪氨酸殘基共價結(jié)合。
免疫熒光:用于免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)、免疫組織化學(xué)(IHC)或原位雜交(ISH)中的信號放大。
低豐度靶標(biāo)檢測:特別適用于檢測低豐度的蛋白質(zhì)或核酸。
多色成像:支持多重檢測,可在同一樣本上標(biāo)記多個目標(biāo)。
作用機制:
CF488A Tyramide 通過酪胺信號放大技術(shù)(TSA)實現(xiàn)信號放大,靈敏度可達(dá)傳統(tǒng)方法的100倍。
1.HRP催化激活:辣根過氧化物酶催化過氧化氫產(chǎn)生氧自由基,使酪胺基團(tuán)氧化為高活性自由基中間體。
2.共價結(jié)合靶點:激活的酪胺自由基與目標(biāo)蛋白/核酸附近的酪氨酸殘基共價結(jié)合,形成穩(wěn)定的標(biāo)記。
3.熒光信號沉積:每個HRP分子可在局部催化沉積大量CF488A酪胺分子,實現(xiàn)熒光信號的空間集中放大。
基礎(chǔ)知識概述:
中文名:CF488A Tyramide
英文名:CF488A Tyramide
規(guī)格標(biāo)準(zhǔn):1mg、5mg、10mg
試劑廠家:陜西新研博美生物科技有限公司
使用方法:
1.樣品前處理:
固定:4%多聚甲醛/PBS,15分鐘。
透化:0.1–0.5% Triton X-100/PBS,5–10分鐘。
封閉:5% BSA或正常血清,30分鐘。
2.一抗孵育:
按說明書稀釋一抗,覆蓋樣品,濕盒避光孵育。
3.HRP-二抗結(jié)合:
洗滌后加入HRP標(biāo)記二抗,室溫孵育30–60分鐘。
4.酪胺工作液配置與反應(yīng):
用含0.003% HO的擴增緩沖液稀釋CF488A Tyramide(200–1000倍),每樣品加100μL,室溫避光孵育5–10分鐘。
注意:超時孵育易導(dǎo)致背景升高,需預(yù)實驗優(yōu)化濃度。
5.終止與復(fù)染:
PBS沖洗3次,每次5分鐘。
核復(fù)染:推薦DAPI(Ex/Em=358/461nm)或Hoechst。
包裝:
質(zhì)量控制:95%+
存儲條件:-20°C,避光,避濕
用途:僅供科研實驗使用,不用于診治
注意事項:取用一定要干燥,避免頻繁的溶解和凍干
取用:現(xiàn)配現(xiàn)用,將包裝從冰箱中取出,置于干燥器中緩慢升至室溫,打開瓶蓋,取用。取用后充入惰性氣體,封口膜封口,擰緊瓶蓋裝入自封袋,及時放入冰箱。
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