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原代內(nèi)膜細胞培養(yǎng)過程中會碰到哪些細胞貼壁障礙
原代內(nèi)膜細胞培養(yǎng)體系是一個為體外生長的人、大鼠、小鼠、兔等哺乳動物器官中的內(nèi)膜細胞設(shè)計的理想的完培方案。本體系是一個基于碳酸氫鹽的緩沖體系，可以在孵育的5%的CO2的氣體環(huán)境下維持一個圍繞pH7.2的酸堿緩沖體系。本體系是一個無菌的液體混合系統(tǒng)，其中包含必須和非必須氨基酸、維生素、激素、生長因子、微量元素和一些其他的有機和無機化合物以及胎牛血清（10%）。本培養(yǎng)體系是基于固定配方配制的液態(tài)培養(yǎng)體系，可以為體外培養(yǎng)的人、大鼠、小鼠、兔等哺乳動物器官中的內(nèi)膜細胞提供一個確定適宜的平衡營養(yǎng)環(huán)境，并且可以選擇性的促進內(nèi)膜細胞的擴增。
細胞貼壁障礙：
貼壁率低或漂浮
原因：
消化過度（胰酶濃度過高或時間過長）損傷細胞表面蛋白；
培養(yǎng)器皿未包被或包被不當(dāng)，缺乏細胞外基質(zhì)支持；
血清濃度不足（<5%）或貼壁因子缺失；
操作溫度過低導(dǎo)致細胞收縮脫落。
解決：
改用低濃度胰酶（0.04%-0.05%）并嚴(yán)格控制消化時間；
使用膠原蛋白（0.1%）、明膠或纖連蛋白包被培養(yǎng)皿；
血清濃度提升至5%-10%（需根據(jù)細胞類型調(diào)整）；
預(yù)熱培養(yǎng)基至37℃，操作環(huán)境維持25℃以上。
傳代后貼壁失敗：
原因：
傳代比例過大（如1:4以上），細胞密度過低無法分泌足夠基質(zhì)；
殘留消化酶損傷或誘導(dǎo)凋亡。
解決：
控制傳代比例為1：2至1：3，接種后24小時內(nèi)靜置培養(yǎng)；
中和胰酶（推薦無血清胰酶抑制劑）。
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