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高通量微升級(jí)液滴培養(yǎng)組學(xué)系統(tǒng)的核心操作
高通量微升級(jí)液滴培養(yǎng)組學(xué)系統(tǒng)是基于液演微流控技術(shù)開發(fā)的微型化高通量單細(xì)胞培養(yǎng)及分選裝備，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)環(huán)境菌群在單細(xì)胞水平上進(jìn)行分離培養(yǎng)，并分選保存至多孔板中，形成雙重備份。單次運(yùn)行實(shí)現(xiàn)可以處理約5000個(gè)液滴（500個(gè)單克隆），液滴生成后存儲(chǔ)于高透氣性管路中進(jìn)行孵育（0-3天），最后通過(guò)光學(xué)信號(hào)（OD、熒光、化學(xué)發(fā)光等）進(jìn)行檢測(cè)分選，分選后的液滴進(jìn)入多孔板中并且可以形成雙重備份。
核心操作流程：
步驟1：液滴生成
將樣品與培養(yǎng)液分別注入芯片進(jìn)樣口，啟動(dòng)液滴生成模塊；
控制液滴體積為1-4μL，通量5000-10000個(gè)/小時(shí)，顯微鏡初步確認(rèn)單細(xì)胞包裹率。
步驟2：液滴培養(yǎng)
液滴轉(zhuǎn)移至高透氣性聚合物管路（如氟化乙烯丙烯共聚物管路）；
設(shè)置培養(yǎng)參數(shù)：
溫度：根據(jù)微生物需求（通常25-37℃）；
時(shí)間：0-60天（常規(guī)培養(yǎng)3-8天）；
氧分壓：需厭氧環(huán)境時(shí)啟用控氧模塊（維持氧氣≤0.04%）。
步驟3：實(shí)時(shí)光學(xué)檢測(cè)
開啟多波段光學(xué)檢測(cè)（OD600/熒光/化學(xué)發(fā)光），以1800-2500個(gè)/小時(shí)速率掃描液滴；
設(shè)定閾值：如OD>0.2判定為生長(zhǎng)陽(yáng)性液滴。
步驟4：目標(biāo)液滴分選
激活分選模塊，將目標(biāo)液滴（如高熒光信號(hào)）精準(zhǔn)噴射至96/384孔板；
分選通量1800-2500個(gè)/小時(shí)，自動(dòng)記錄位置并生成雙重備份。
步驟5：液滴回收與驗(yàn)證
分選后孔板移出，穿刺液滴釋放細(xì)胞；
涂布平板或PCR驗(yàn)證單克隆純度。
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