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樣本質(zhì)量是熒光定量檢測（如qPCR、熒光定量免疫分析等）結(jié)果準(zhǔn)確性的根基，其影響貫穿從核酸/蛋白提取到最終信號讀取的全流程，核心問題集中在干擾檢測體系、引入假陽性/假陰性或?qū)е聰?shù)據(jù)失真。具體影響及機(jī)制如下：
一、樣本采集與保存不當(dāng)：破壞目標(biāo)物質(zhì)穩(wěn)定性
樣本從采集到處理的每一步操作失誤，都會直接影響目標(biāo)分析物（核酸、蛋白等）的完整性或濃度。
降解問題：
核酸樣本（如血液、組織）若未及時冷藏或添加穩(wěn)定劑（如EDTA、RNA保存液），會因核酸酶（DNase、RNase）活性激活導(dǎo)致DNA/RNA斷裂，qPCR中可能因引物無法有效結(jié)合而出現(xiàn)擴(kuò)增效率下降，Ct值偏大甚至無擴(kuò)增。
蛋白樣本若反復(fù)凍融或高溫保存，會因變性聚集失去抗原性，導(dǎo)致熒光免疫檢測中抗體結(jié)合效率降低，信號強度偏低。
濃度偏差：
采集量不足（如血清量過少）或保存過程中蒸發(fā)，會導(dǎo)致目標(biāo)物質(zhì)濃度被高估（因溶劑減少）；而溶血、脂血樣本（如紅細(xì)胞破裂釋放血紅蛋白）會稀釋目標(biāo)物，造成濃度低估。
二、樣本基質(zhì)干擾：抑制檢測反應(yīng)或產(chǎn)生背景信號
樣本中除目標(biāo)物外的其他成分（基質(zhì)）可能通過物理或化學(xué)作用干擾檢測體系，尤其在未充分提純的樣本中更明顯。
PCR抑制劑：
血液中的血紅蛋白、膽紅素，土壤中的腐殖酸，植物樣本中的多酚類物質(zhì)等，會通過螯合Mg²?（PCR酶輔因子）、吸附DNA聚合酶或直接破壞核酸結(jié)構(gòu)，抑制擴(kuò)增反應(yīng)。例如，未純化的全血樣本直接擴(kuò)增時，常出現(xiàn)Ct值延遲或擴(kuò)增曲線異常（如平臺期提前）。
熒光淬滅或增強：
某些基質(zhì)成分（如深色色素、高濃度鹽離子）會吸收或散射激發(fā)光，導(dǎo)致熒光信號被淬滅（信號偏低）；而脂質(zhì)顆?？赡芊翘禺愋越Y(jié)合熒光染料（如SYBRGreen），產(chǎn)生背景熒光（假陽性信號）。
非特異性結(jié)合：
在熒光免疫檢測中，樣本中的雜蛋白可能與抗體交叉反應(yīng)，或吸附在檢測孔表面，導(dǎo)致背景信號升高，降低檢測特異性。
三、樣本前處理缺陷：引入誤差或污染
前處理（如提取、純化、稀釋）是樣本質(zhì)量控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，操作不當(dāng)會放大誤差。
提取效率低：
核酸/蛋白提取時若裂解不充分（如組織未徹底勻漿），會導(dǎo)致目標(biāo)物回收率低，測量值低于真實值；而離心不徹底殘留的雜質(zhì)（如細(xì)胞碎片）會堵塞光路或干擾反應(yīng)。
交叉污染：
處理多個樣本時，若移液器污染、耗材重復(fù)使用或環(huán)境中存在擴(kuò)增產(chǎn)物氣溶膠，會導(dǎo)致樣本間交叉污染，出現(xiàn)假陽性結(jié)果（尤其是qPCR檢測低豐度目標(biāo)時）。
稀釋誤差：
高濃度樣本需稀釋至檢測線性范圍內(nèi)，若稀釋倍數(shù)計算錯誤或混合不均，會導(dǎo)致結(jié)果偏離真實值（如10倍稀釋操作失誤變?yōu)?倍，結(jié)果被高估1倍）。
四、樣本均一性差：導(dǎo)致重復(fù)檢測結(jié)果波動
樣本本身的物理不均一會使平行實驗間差異增大，尤其對固體或半固體樣本影響顯著。
組織樣本異質(zhì)性：
腫瘤組織中癌細(xì)胞分布不均，若取樣位置不同，目標(biāo)基因（如癌基因）的表達(dá)量可能差異顯著，導(dǎo)致重復(fù)檢測的Ct值標(biāo)準(zhǔn)差增大（通常要求平行樣Ct值差＜0.5，否則結(jié)果不可靠）。
懸浮樣本沉淀：
細(xì)胞懸液、細(xì)菌培養(yǎng)液若未充分混勻，取樣時目標(biāo)物濃度隨時間變化，會導(dǎo)致平行孔間信號差異超過允許范圍（如CV值＞5%）。
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