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藻類計(jì)數(shù)儀是水體生態(tài)監(jiān)測、環(huán)境評估及水產(chǎn)養(yǎng)殖等領(lǐng)域的關(guān)鍵工具，其操作規(guī)范性直接影響數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性與可靠性。以下從樣品制備、儀器調(diào)試、觀測計(jì)數(shù)、結(jié)果處理四大核心環(huán)節(jié)，詳解使用細(xì)節(jié)。
一、樣品采集與預(yù)處理：奠定數(shù)據(jù)基礎(chǔ)
樣品需具有代表性，采集時(shí)應(yīng)避開水面漂浮物與底部沉積物，采用垂直分層采樣法(如表層、中層、底層)混合均勻。若需定量分析，需同步記錄采樣體積(如1L)。對于含懸浮顆粒較多的水樣，需經(jīng)30-50μm孔徑濾膜預(yù)過濾去除大型雜質(zhì)，但需注意避免過度過濾損失目標(biāo)藻類。若需區(qū)分活體與死體藻類，可加入終濃度0.1%的中性紅染色液，活體細(xì)胞會(huì)被染成紅色。樣品保存時(shí)間不宜超過24小時(shí)，低溫(4℃)避光保存可減緩藻類形態(tài)變化。
二、儀器調(diào)試：精準(zhǔn)匹配觀測條件
開機(jī)預(yù)熱10-15分鐘，確保光源穩(wěn)定。根據(jù)藻類密度選擇合適的計(jì)數(shù)池(如浮游植物計(jì)數(shù)框)，高豐度樣品需稀釋至視野內(nèi)細(xì)胞數(shù)≤100個(gè)/視野。調(diào)整物鏡倍數(shù)(常用10×或40×)，通過粗/微調(diào)焦旋鈕使細(xì)胞圖像清晰聚焦。設(shè)置合適的光照強(qiáng)度——部分藻類(如藍(lán)藻)對強(qiáng)光敏感，需降低光源亮度防止光損傷導(dǎo)致的形態(tài)改變；硅藻等具紋飾結(jié)構(gòu)的類群則需較強(qiáng)透射光凸顯殼面特征。若儀器配備自動(dòng)掃描功能，需提前校準(zhǔn)掃描速度與圖像分辨率，避免漏計(jì)或重復(fù)計(jì)數(shù)。
三、觀測與計(jì)數(shù)：標(biāo)準(zhǔn)化操作避偏差
采用“之”字形路徑遍歷整個(gè)計(jì)數(shù)室，避免遺漏邊緣區(qū)域。對重疊細(xì)胞需通過調(diào)節(jié)焦距分離至單層后計(jì)數(shù)，若無法區(qū)分則按半個(gè)體計(jì)算。對于鏈狀群體(如微囊藻)或膠群體(如顫藻)，需整體計(jì)數(shù)并記錄群體大小。遇到難以鑒定的物種時(shí)，可拍攝顯微照片留存比對。建議每個(gè)樣品至少計(jì)數(shù)2個(gè)平行樣，取平均值以降低隨機(jī)誤差。若單次計(jì)數(shù)變異系數(shù)>15%，需增加重復(fù)次數(shù)至5次以上。
四、結(jié)果計(jì)算與質(zhì)量控制
根據(jù)公式“細(xì)胞密度=計(jì)數(shù)值×稀釋倍數(shù)/采樣體積”計(jì)算原始數(shù)據(jù)。需特別注意單位換算(如cells/L)。建立質(zhì)量控制體系：①空白對照(無菌水)檢驗(yàn)試劑污染；②加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證方法準(zhǔn)確性；③定期用標(biāo)準(zhǔn)粒子溶液校準(zhǔn)計(jì)數(shù)視野面積。數(shù)據(jù)記錄應(yīng)包含采樣時(shí)間、地點(diǎn)、水溫、pH等環(huán)境參數(shù)，便于后續(xù)相關(guān)性分析。
五、維護(hù)與保養(yǎng)：延長設(shè)備壽命
每次使用后及時(shí)清理計(jì)數(shù)池殘留物，先用蒸餾水沖洗，再用75%乙醇浸泡消毒。物鏡鏡頭只能用擦鏡紙蘸取少量酒精混合液單向擦拭。長期不用時(shí)需拔除電源線，罩上防塵罩存放于干燥環(huán)境。定期檢查光源燈泡壽命，及時(shí)更換以保證光照強(qiáng)度穩(wěn)定。電子元件避免接觸腐蝕性液體，出現(xiàn)故障時(shí)應(yīng)聯(lián)系專業(yè)人員維修。
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