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人淋巴細胞 CIK治療用液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)流程

來源：重慶市華雅干細胞技術有限公司 2025年08月04日 11:48

人淋巴細胞CIK（Cytokine-InducedKiller）治療的液體培養(yǎng)基培養(yǎng)流程主要分為幾個步驟，具體包括淋巴細胞的分離、培養(yǎng)、激活及擴增。以下是一個常見的培養(yǎng)流程：

1.樣本收集與淋巴細胞分離

采集外周血：使用抗凝劑（如肝素）從患者或供體采集外周血。

分離外周血單核細胞（PBMC）：使用密度梯度離心（如Ficoll-Paque）分離出外周血單核細胞（PBMC）。

2.細胞激活

培養(yǎng)基選擇：常用的培養(yǎng)基為RPMI-1640或IMDM培養(yǎng)基，加入10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/鏈霉素。

細胞激活劑：添加刺激淋巴細胞增殖的細胞因子，常見的細胞因子包括：

IL-2（白介素-2）：激活T細胞的增殖和擴增。

IFN-γ（干擾素-γ）：促進細胞毒性作用。

抗CD3抗體（如OKT3）或者其他T細胞受體激活劑。

抗CD28抗體：增強T細胞的激活反應。

激活過程通常在37°C、5%CO?的條件下進行，培養(yǎng)時間為2-3天。

3.擴增培養(yǎng)

在激活后細胞需要繼續(xù)擴增，通常會在培養(yǎng)基中添加更多的IL-2，以維持細胞的增殖。細胞數(shù)量一般會在3-5天內(nèi)顯著增加。

為了維持細胞活性和增殖，定期更換培養(yǎng)基（大約每兩天一次），并補充IL-2。

4.細胞收獲

細胞檢測：使用流式細胞術檢測CIK細胞的純度和細胞毒性。

細胞培養(yǎng)結束后，通過離心收集細胞，進行后續(xù)的應用或治療。此時CIK細胞通常已具有較強的細胞毒性活性。

5.質(zhì)量控制

細胞鑒定：通過流式細胞術或PCR鑒定細胞的標志物，例如CD3、CD56、CD8等。

細胞功能測試：檢測CIK細胞的細胞毒性活性，包括對腫瘤細胞的殺傷效果。

6.凍存（可選）

如果需要長期保存，可以將CIK細胞進行凍存。使用適當?shù)膬龃嬉海ㄈ绾蠨MSO的凍存液）進行低溫保存。

培養(yǎng)基配方（常見示例）：

RPMI-1640培養(yǎng)基

10%FBS

1%青霉素/鏈霉素

10ng/mlIL-2（用于增殖和激活）

50ng/mlIFN-γ

抗CD3抗體（可選）

注意事項：

培養(yǎng)環(huán)境：保持37°C，5%CO?環(huán)境，確保細胞生長良好。

細胞因子的添加：根據(jù)需要可以調(diào)整IL-2和IFN-γ的濃度，以優(yōu)化細胞增殖和功能。

此流程為基礎的CIK細胞培養(yǎng)流程，具體的實驗細節(jié)可以根據(jù)不同的實驗要求進行調(diào)整。

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