一、產(chǎn)品信息

平臺編號：Bio-53914

規(guī)格：1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

細胞信息：原代細胞

細胞名稱：小鼠星形膠質(zhì)細胞

用途：研究

注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準）

二、細胞詳述

星形膠質(zhì)細胞，是膠質(zhì)細胞中體積的一種。從胞體發(fā)出許多長而分支的突起，伸展充填在神經(jīng)細胞的胞體及其突起之間，起支持和分隔神經(jīng)細胞的作用。

纖維性星形膠質(zhì)細胞多分布在腦脊髓的皮質(zhì)，突起細長，分支較少，胞質(zhì)中含，多分布在灰質(zhì)，細胞突起粗短，分支多。胞質(zhì)內(nèi)膠質(zhì)絲較少，又稱苔狀細胞。電鏡下星形膠質(zhì)細胞的胞核有缺失，胞質(zhì)較清亮，游離核糖核蛋白體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)均很少，糖原顆粒豐富，有大量的膠質(zhì)絲。纖維形星形膠質(zhì)細胞的突起呈長圓柱形，而原漿性星形膠質(zhì)細胞的突起呈薄片狀，并常包裹著神經(jīng)細胞及其突觸。星形膠質(zhì)細胞的腳板與血管內(nèi)皮細胞之間相隔一層基板，腳板質(zhì)膜與基板接觸處有半橋粒結(jié)構(gòu)。

三、細胞特性

1)組織來源于實驗動物的正常腦組織。

2)細胞鑒定：神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)免疫熒光染色法。

3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

5)細胞生長方式：星狀細胞，貼壁培養(yǎng)。

四、產(chǎn)品的運輸和保存

視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。

1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復(fù)蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。

2)T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

五、產(chǎn)品使用

1)本產(chǎn)品僅能用于科研

2)本產(chǎn)品未通過直接用于活體動物和人的審核

3)本產(chǎn)品未通過用于活體診斷的審核

六、接受后的處理方法

1)收到細胞后,請檢查是否漏液 ,如果漏液,請拍照片發(fā)給我們。

2)請先在顯微鏡下確認細胞生長 狀態(tài),去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。

3)棄去T25瓶中的培養(yǎng)基,添加 6ml本公司附帶的培養(yǎng)基。

4)如果細胞密度達80%-90%請及時進行細胞傳代,傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的培養(yǎng)基。

5)接到細胞次日,請檢查細胞是否污染,若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染,請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。

七、培養(yǎng)操作

1)復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入 4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?10cm 皿中,加入約 8ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2)細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。

2.加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3.按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4.將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類：

1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓脫落后,加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2.4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍存管做好標識。

3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

八、培養(yǎng)注意事項

1、收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關(guān)信息,如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等,確保細胞培養(yǎng)條件一致。若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題,責任由客戶自行承擔。

3、用 75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,將細胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng) 4~6 小時,再取出觀察。此時多數(shù)細胞均會貼壁,若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力,如果證實細胞活力正常, 請將細胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng);如果染色結(jié)果顯示細胞無活力,請拍下照片及時和我們聯(lián)系,信息確認后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。

4、靜置細胞貼壁后,請將細胞瓶內(nèi)的培養(yǎng)基倒出,留 6~8mL 維持細胞正常培養(yǎng),待細胞匯合度 80%左右時正常傳代。

5、請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用,細胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合,使細胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。

6、建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片,記錄細胞狀態(tài),便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,告知細胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7、該細胞僅供科研使用。

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