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高效封閉液是實(shí)驗(yàn)中常用的試劑，主要用于減少非特異性結(jié)合，提升實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和信噪比。其使用方法因產(chǎn)品類型和實(shí)驗(yàn)體系的不同而有所差異，但通常遵循一套標(biāo)準(zhǔn)化的流程。
一、使用前的準(zhǔn)備
選擇合適的封閉液：
根據(jù)實(shí)驗(yàn)類型(如Western blot、免疫熒光、免疫組化等)和膜的類型(如PVDF膜、NC膜等)選擇合適的高效封閉液。
常見(jiàn)的封閉液類型包括BSA(牛血清白蛋白)封閉液、脫脂奶粉封閉液、即用型快速封閉液等。即用型快速封閉液因其操作便捷、封閉時(shí)間短而越來(lái)越受歡迎。
準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料：
確保轉(zhuǎn)印后的膜已正確放置，且表面無(wú)氣泡或褶皺。
準(zhǔn)備適量的封閉液，根據(jù)膜的大小和實(shí)驗(yàn)需求確定用量。
預(yù)處理封閉液(如需)：
某些封閉液在使用前可能需要稀釋或加熱處理。例如，脫脂奶粉封閉液通常需要用TBST(Tris-Buffered Saline with Tween-20)稀釋至適當(dāng)濃度(如5%)。
即用型快速封閉液則無(wú)需稀釋，直接使用即可。
二、封閉操作步驟
加入封閉液：
將轉(zhuǎn)印后的膜浸入裝有適量封閉液的容器中，確保膜的所有部分都被封閉液覆蓋。
對(duì)于小尺寸的膜，可以使用密封袋或培養(yǎng)皿等容器；對(duì)于大尺寸的膜，則可能需要使用更大的容器或?qū)ｉT的封閉槽。
封閉條件設(shè)置：
溫度：通常選擇室溫(約25℃)進(jìn)行封閉，但某些封閉液可能在特定溫度下效果更佳。例如，某些即用型快速封閉液可能在37℃下封閉效果更好。
時(shí)間：封閉時(shí)間因封閉液類型和實(shí)驗(yàn)需求而異。傳統(tǒng)封閉液如BSA或脫脂奶粉通常需要封閉30分鐘至1小時(shí)；而即用型快速封閉液則可能只需封閉5-15分鐘。
搖床振蕩：在封閉過(guò)程中，使用搖床進(jìn)行緩慢振蕩可以促進(jìn)封閉液與膜的充分接觸，提高封閉效果。振蕩速度通常設(shè)置為低速(如50-100 rpm)。
封閉結(jié)束后的處理：
封閉結(jié)束后，倒掉封閉液，并用適量的洗滌液(如TBST)洗滌膜數(shù)次，以去除殘留的封閉液。
洗滌次數(shù)和時(shí)間因?qū)嶒?yàn)需求而異，但通常建議洗滌3次，每次5分鐘。
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