膽固醇標(biāo)準(zhǔn)品

公司是由留學(xué)美國多年的資深學(xué)者創(chuàng)辦的一家*企業(yè)，與中國農(nóng)業(yè)大學(xué)、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)、哈爾濱獸醫(yī)研究所等多家高校及生物技術(shù)研究機(jī)構(gòu)建立了合作關(guān)系。公司以開發(fā)的動物疾病診斷試劑、食品安全檢測試劑、人體疾病診斷試劑、環(huán)境監(jiān)測試劑、新型酶制劑、微生物制劑、蛋白質(zhì)產(chǎn)品、核苷酸產(chǎn)品、綠色水產(chǎn)藥品、小分子抗原抗體、基因重組抗原抗體等生物化學(xué)制品為主，以*的化企業(yè)經(jīng)營理念、雄厚的研發(fā)實力、規(guī)范化的生產(chǎn)標(biāo)準(zhǔn)、健全的銷售網(wǎng)絡(luò)、完善的技術(shù)服務(wù)體系和廣闊的國內(nèi)外合作網(wǎng)絡(luò)服務(wù)于，致力于生物制劑在的產(chǎn)業(yè)化。

膽固醇主要存在于蛋黃中，因此，測定雞蛋中膽固 醇含量多以蛋黃為樣本進(jìn)行測定。膽固醇含量的分 析方法有酶法、比色法、液相色譜法、氣相色譜 法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等，試劑盒法是基于酶 法測定膽固醇的原理進(jìn)行的，比色法一種依據(jù)顯色 反應(yīng)來分析的傳統(tǒng)方法，色譜法是適用范圍較廣、 靈敏度較高的分析方法，而液相色譜不需要載 氣，在使用上較氣相色譜和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的方法簡便。本試驗對液相色譜法、皂化-比色法和 試劑盒法測定蛋黃膽固醇的過程和結(jié)果進(jìn)行研究和 比較，為雞蛋膽固醇含量測定工作提供方法指導(dǎo)。

1.1 試驗材料 蛋黃由市售新鮮雞蛋中取出；膽固醇標(biāo)準(zhǔn)品， 純度≥99.7% （由中國計量科學(xué)研究院提供） ；總膽 固醇試劑盒 （酶法） 由北京北化康泰臨床試劑有限公 司提供。

顯色液為 FeSO4-冰乙酸-濃硫酸，將 Fe? SO4 100 mg 溶于 1mL 蒸餾水中，再加入 100 mL 冰乙 酸混合溶解，然后與 100 mL 濃硫酸緩慢混勻，冷 卻后使用。 1.2 試驗方法 1.2.1 HPLC 法 取新鮮蛋黃稀釋液 （濃度為 0.1 g ·mL-1） mL 1.0 于 10 mL 離心管中，加入 95%乙醇 1.0 mL，用漩渦 振蕩器混勻后，加入yi醚 2.5 mL，再次混勻后加入 石油醚 2.5 mL，震蕩混勻，3 000 rpm 離心 5 min， 移出上層萃取液，在低于 45 ℃下用氮氣吹干，加 無水乙醇溶解殘余物 2.0 mL，用 0.45 μm 有機(jī)微孔 濾 膜 過濾后進(jìn)樣。色譜條件為色譜柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18，4.6 mm × 150 mm，5 μm；流動 相：乙腈-異丙醇 ?????? （4 1，V/V） ；流速：0.8 mL min-1； · 柱溫：35 ℃；檢測波長：210 nm；進(jìn)樣量：10 μL。

取膽固醇標(biāo)準(zhǔn)品用色譜級無水乙醇溶解配成濃度為 1 mg·mL-1 的標(biāo)準(zhǔn)液，取標(biāo)準(zhǔn)液稀釋成不同濃度 （0~1 000 μg mL-1） · ，以膽固醇濃度為橫坐標(biāo)，峰面 積值為縱坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。采用外標(biāo)法定量分析 樣品中膽固醇含量。