嗜肺軍團(tuán)菌的發(fā)病機(jī)理與微生物檢查及防治原則!
嗜肺軍團(tuán)菌是一種有鞭毛,革蘭氏陰性,軍團(tuán)菌屬多形態(tài)性的短小球桿菌。二名法 Legionella pneumophila Brenner DJ, Steigerwalt AG, McDade JE 1979
一、菌種簡介
1976年美國費(fèi)城退伍軍人協(xié)會(huì)會(huì)員中曾爆發(fā)急性發(fā)熱性呼吸道疾病,經(jīng)研究,發(fā)現(xiàn)一種細(xì)菌命名為嗜肺軍團(tuán)菌。隨后,許多有關(guān)細(xì)菌暫被列入這一屬,且追溯研究發(fā)現(xiàn)早在1943年即有軍團(tuán)人員病的病例?,F(xiàn)已提出了超過30種軍團(tuán)桿菌,至少19種是人類肺炎的病原。其中見病原體為嗜肺軍團(tuán)菌(占病例的85%~90%),其次是L. micdadei(占5%~10%),再次是L. bozemanii和L. dumoffii。此類細(xì)菌形態(tài)相似,具有共同的生化特征,引起類似疾病。
冷卻水、冷凝水中嗜肺軍團(tuán)菌特征描述
嗜肺軍團(tuán)菌不抗酸,無孢子,無莢膜,類似于桿菌。不能分解明膠、糖類或是尿素,同時(shí),不可參加酵解反應(yīng)。嗜肺軍團(tuán)菌無色,也非自身熒光。氧化酶與過氧化氫酶測試陽性。β-內(nèi)酰胺酶陽性。
專性需氧,在自然界可長期存活,如在蒸餾水中可存活139天,自來水中可存活369天,對熱和一般消毒劑敏感。菌落特征為灰白色,有光澤,濕潤,圓形,凸起,并有特殊臭味。革蘭氏染色不明顯,多用鍍銀法或Giemsa法染色。
二、細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)
嗜肺軍團(tuán)菌,雖然是革蘭氏陰性的有機(jī)體,可是它巨大的感染力是來自于它的細(xì)胞外膜小葉上包含有脂多糖抗原。
血清不僅用于血液凝集的研究,還可用于直接觀察熒光標(biāo)記過的組織抗體?;颊唧w內(nèi)的特殊抗體可以被熒光抗體間接檢測。這項(xiàng)測試也已成功應(yīng)用于酶聯(lián)免疫吸附法與微量凝集試驗(yàn)。
三、發(fā)病機(jī)理
嗜肺軍團(tuán)菌是一種細(xì)胞兼性寄生的細(xì)菌,可入侵變形蟲,或是人類的巨噬細(xì)胞內(nèi)。該菌的感染力在抗體和血清補(bǔ)體存在下大大提高(但并非需要兩者存在)。該菌會(huì)因噬菌作用被偽足包裹進(jìn)入巨噬細(xì)胞,之后,菌體被細(xì)胞產(chǎn)生的自噬體包裹起來,這卻阻止了溶酶體的溶解。在這層保護(hù)之下,細(xì)菌大量繁殖。該菌利用一種型為IVB的分泌系統(tǒng)分泌的名為Dot/Icm(細(xì)胞器運(yùn)行缺失/細(xì)胞內(nèi)繁殖)宿主入侵效應(yīng)蛋白。這些效應(yīng)器可以提升細(xì)菌在宿主細(xì)胞的存活力。該菌會(huì)在培養(yǎng)液里由II型分泌系統(tǒng)產(chǎn)生一種大小約為39kDa的金屬蛋白,這種蛋白對某些組織培養(yǎng)的細(xì)胞有毒害。II型分泌系統(tǒng)也是毒化作用的必需。
1976年,美國賓夕法尼亞州的費(fèi)城舉辦了一次退伍軍人會(huì)議,參加者中超過200人發(fā)生肺炎,其中34人遇難。經(jīng)查明,這次事件的元兇是一種當(dāng)時(shí)尚未發(fā)現(xiàn)的細(xì)菌——嗜肺軍團(tuán)菌(該病也因此命名為軍團(tuán)?。?。這次事件反映了嗜肺軍團(tuán)菌并非小面積的人與人的傳染。
四、基因組
2004年,三種類型的嗜肺軍團(tuán)菌的基因序列已被成功測定,這為從分子生物學(xué)層次了解嗜肺軍團(tuán)菌及軍團(tuán)菌屬鋪平道路。對180種嗜肺軍團(tuán)屬的DNA序列改變的基因比對檢測證實(shí)了其基因具有高塑性以及頻繁的突變頻率。更詳細(xì)的有關(guān)其生活周期的資料是來自于對生活在其自然宿主——卡氏棘阿米巴之中的嗜肺軍團(tuán)菌的基因表達(dá)分布的研究。研究發(fā)現(xiàn)了嗜肺軍團(tuán)菌的生活周期分為兩段,而且深入研究了其可感染、可復(fù)制的特性。
五、微生物檢查
1、一般取下呼吸道分泌物、肺活檢組織或胸前積液等標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢查。
2、用BCYE培養(yǎng)基分離細(xì)菌,再根據(jù)肺炎特性、菌落特征、生化反應(yīng)作出鑒定,但往往結(jié)果出現(xiàn)較晚。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)嗜肺軍團(tuán)菌有15個(gè)血清型。其中,嗜肺軍團(tuán)菌血清1型(Lp1)與人類疾病關(guān)系最密切,其次為血清4型(Lp4)和6型(Lp6)。關(guān)于血清凝集法用的診斷血清方面,推薦天津生物芯片生產(chǎn)的嗜肺軍團(tuán)菌全套診斷血清產(chǎn)品。
3、可將標(biāo)本用一只熒光標(biāo)記抗體進(jìn)行直接熒光實(shí)驗(yàn),既特異又可做出快速診斷。
4、可用ELISA、RIA及乳膠凝集等試驗(yàn)檢測標(biāo)本中該菌特異性抗原或用PCR技術(shù)檢查該菌核酸進(jìn)行快速診斷。核酸擴(kuò)增技術(shù),即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chainreaction,PCR),其基本原理是設(shè)計(jì)、合成兩條寡核苷酸,作為引物,對應(yīng)于待測病原微生物某一段特異性序列的兩端,然后在體外模擬DNA體內(nèi)復(fù)制的過程反復(fù)擴(kuò)增,使靶序列放大上萬倍甚至上百萬倍而被檢測出來。
1)常規(guī)PCR:鑒定標(biāo)準(zhǔn)是通過電泳來判斷是否有擴(kuò)增的核酸片段以及擴(kuò)增產(chǎn)物的大小是否正確。
2)實(shí)時(shí)熒光PCR:通過對實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)的每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物進(jìn)行熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)監(jiān)測來判斷分析。
六、防治原則
加強(qiáng)水資源管理及人工輸水管道和設(shè)施的消毒處理,防治軍團(tuán)菌造成空氣和水源污染,是預(yù)防軍團(tuán)菌病擴(kuò)散的重要措施;治療紅霉素。
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