高效質(zhì)粒DNA提?。涸噭┖性砼c操作步驟詳解 -賽默飛

百家號正文： 

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賽默飛世爾科技提供廣泛的質(zhì)粒 DNA 提取產(chǎn)品，旨在以您需要的純度和規(guī)模分離質(zhì)粒 DNA。我們擁有多種高性能且經(jīng)濟高效的質(zhì)粒純化技術(shù)供選擇，這些技術(shù)旨在幫助您克服常見的質(zhì)粒制備問題，如低回收率和殘留雜質(zhì)。了解如何使用我們的試劑盒和質(zhì)粒分離實驗方案手動純化質(zhì)粒 DNA。 

賽默飛提供質(zhì)粒DNA提取和分離產(chǎn)品，請訪問獲取產(chǎn)品最新信息。 

什么是質(zhì)粒純化？ 

質(zhì)粒純化又稱為質(zhì)粒分離或質(zhì)粒 DNA 分離，是指從細(xì)菌細(xì)胞中提取和純化質(zhì)粒 DNA，使科研人員獲得高度濃縮和純化的質(zhì)粒形式，以便進一步分析和實驗。質(zhì)粒純化的關(guān)鍵步驟通常包括細(xì)菌細(xì)胞裂解、去除細(xì)胞碎片、結(jié)合質(zhì)粒 DNA、清洗、洗脫質(zhì)粒 DNA 以及根據(jù)下游應(yīng)用的可選附加步驟。 

為什么質(zhì)粒純化如此重要？ 

質(zhì)粒純化至關(guān)重要，因為質(zhì)粒DNA（pDNA）是基因工程中的基礎(chǔ)工具，支持克隆、基因表達研究和治療開發(fā)等應(yīng)用。高質(zhì)量的質(zhì)粒DNA對于確保關(guān)鍵下游項目（如疫苗生產(chǎn)、細(xì)胞和基因治療）的準(zhǔn)確性和可靠性至關(guān)重要，有助于推動科學(xué)突破。 

傳統(tǒng)手動質(zhì)粒純化的關(guān)鍵步驟通常包括： 

· 收集細(xì)菌：離心20–30分鐘 

· 重懸、裂解、中和：在實驗臺上操作15–20分鐘 

· 澄清裂解液：使用離心機、注射器或真空裝置5–10分鐘；“去除內(nèi)毒素” 

· 結(jié)合、清洗、洗脫、沉淀：使用滴液技術(shù)和/或離心45–60分鐘 

· 重懸于溶液中：在實驗臺上操作10分鐘 

總預(yù)計時間：95–130分鐘 

理解質(zhì)粒純化 

質(zhì)粒純化有兩個主要考慮因素：制備規(guī)模和純度等級。這兩者直接影響到下游應(yīng)用的成功與否。從小規(guī)模研究到大規(guī)模治療生產(chǎn)，這些因素——以及適當(dāng)?shù)募兌?/span>/內(nèi)毒素水平——有助于確保獲得適量的質(zhì)粒DNA，從而實現(xiàn)可靠且可重復(fù)的預(yù)期結(jié)果。 

質(zhì)粒DNA分離的制備規(guī)模 

質(zhì)粒有不同的大小，包括小型（1–10 kb）、中型（10–50 kb）和大型（>50 kb）。小型質(zhì)粒非常適合基礎(chǔ)克隆和基因表達研究，中型質(zhì)粒用于更復(fù)雜的基因工程任務(wù)，而大型質(zhì)粒則適用于創(chuàng)建基因組文庫和大規(guī)?；蝽椖?。了解適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基和質(zhì)粒大小對于在基因研究和生物技術(shù)中取得成功至關(guān)重要。 

質(zhì)粒生長培養(yǎng)基，如LB肉湯、Terrific Broth (TB)、SOC培養(yǎng)基和2xYT，對于培養(yǎng)含有質(zhì)粒的細(xì)菌細(xì)胞至關(guān)重要。這些營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基可以提高質(zhì)粒產(chǎn)量，優(yōu)化細(xì)菌生長條件，并提高轉(zhuǎn)化效率，使其成為各種分子生物學(xué)實驗的多功能工具。 

質(zhì)粒 DNA 分離的制備量 

表 1. 從小量制備（1–5 mL）到宏量制備（2.5–5 L）的每種質(zhì)粒制備規(guī)模所需的過夜培養(yǎng)菌液體積以及質(zhì)粒 DNA（pDNA）的大致產(chǎn)量。 

質(zhì)粒 DNA 分離純度等級和內(nèi)毒素水平 

當(dāng)涉及到質(zhì)粒分離時，科研人員可以根據(jù)他們的具體需求進行一系列選擇。分子級質(zhì)粒分離技術(shù)提供了速度和成本效益，使其非常適合克隆、核酸標(biāo)記、PCR 和測序等穩(wěn)健應(yīng)用，其中高純度水平并非必需。另一方面，轉(zhuǎn)染級質(zhì)粒純化技術(shù)專為需要更高純度和更高產(chǎn)量的應(yīng)用而設(shè)計，例如標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞系的轉(zhuǎn)染和體外轉(zhuǎn)錄。轉(zhuǎn)染級質(zhì)粒 DNA 也可用于分子級應(yīng)用。對于最敏感的應(yīng)用，如轉(zhuǎn)染敏感細(xì)胞系或體內(nèi)研究，推薦采用高級轉(zhuǎn)染級質(zhì)粒分離技術(shù)。該技術(shù)有助于確保純度，也可用于所有分子和轉(zhuǎn)染級應(yīng)用。 

對質(zhì)粒 DNA 進行穩(wěn)健的純化，以滿足下游應(yīng)用所需的產(chǎn)量和純度，是任何蛋白表達工作流程的關(guān)鍵步驟。了解如何獲得轉(zhuǎn)染級質(zhì)粒并將其與 Gibco ExpiCHO 和 Expi293 瞬時哺乳動物表達系統(tǒng)一起使用。 

自動化質(zhì)粒純化解決方案 

自動化質(zhì)粒純化?是一種利用機器人技術(shù)簡化流程的先進技術(shù)。賽默飛世爾科技提供自動化質(zhì)粒純化解決方案，可實現(xiàn)高通量且無需離心的轉(zhuǎn)染級質(zhì)粒 DNA 純化。這些解決方案通過精確控制純化步驟和試劑體積，最大限度地減少了人為錯誤，并有助于確保重現(xiàn)性。對于小規(guī)模應(yīng)用，專門的磁珠純化試劑盒可用于在整合液體處理能力的 KingFisher 平臺上高效分離質(zhì)粒 DNA。同樣，對于大規(guī)模自動化而言， KingFisher PlasmiPro 全自動大規(guī)模質(zhì)粒提取儀使用預(yù)分裝卡盒，實現(xiàn)無需手動操作的純化體驗。通過該過程獲得的純化質(zhì)粒 DNA 可用于一系列下游應(yīng)用，包括轉(zhuǎn)染、載體制備、酶修飾、克隆、測序、體外?轉(zhuǎn)錄 / 翻譯等。 

使用KingFisher PlasmidPro實現(xiàn)質(zhì)粒純化自動化 

了解如何使用KingFisher PlasmidPro 全自動大規(guī)模質(zhì)粒提取儀實現(xiàn)您的質(zhì)粒DNA分離自動化。這是KingFisher儀器系列中的最新成員。 

質(zhì)粒DNA純化試劑盒 

在質(zhì)粒純化過程中，裂解細(xì)菌會釋放大量內(nèi)毒素，這些內(nèi)毒素可能對細(xì)胞生長、細(xì)胞活性、轉(zhuǎn)染效率、蛋白質(zhì)表達產(chǎn)生負(fù)面影響，甚至模擬人類敗血癥。賽默飛世爾科技提供的純化試劑盒，可滿足不同純度等級的質(zhì)粒DNA（pDNA）需求，包括轉(zhuǎn)染級、高級轉(zhuǎn)染級和分子級試劑盒。 

賽默飛世爾科技的端到端解決方案。本工作流程展示了蛋白質(zhì)表達的端到端解決方案，以及質(zhì)粒純化如何與整個過程相關(guān)聯(lián)。賽默飛為過程的每一步都提供了解決方案。質(zhì)粒設(shè)計可以從Gene Art質(zhì)粒服務(wù)開始，而質(zhì)粒生產(chǎn)則可以使用克隆和載體插入片段驗證、轉(zhuǎn)化和培養(yǎng)生長等技術(shù)。質(zhì)粒純化可以使用KingFisher PlasmidPro 全自動大規(guī)模質(zhì)粒提取儀實現(xiàn)自動化，使用MagMAX Pro HT NoSpin 質(zhì)粒小量制備試劑盒和KingFisher 純化系統(tǒng)，或者 PureLink和Expi試劑盒手動進行。該工作流程可以通過克隆、哺乳動物細(xì)胞表達、轉(zhuǎn)染和使用Gibco ExpiCHO等系統(tǒng)的蛋白質(zhì)表達來完成。 

轉(zhuǎn)染級質(zhì)粒 DNA 純化試劑盒 

轉(zhuǎn)染級質(zhì)粒分離試劑盒專為需要從細(xì)菌培養(yǎng)物中提取具有極低內(nèi)毒素水平的質(zhì)粒 DNA（pDNA）的科研人員設(shè)計。在質(zhì)粒純化過程中，大量內(nèi)毒素從裂解細(xì)菌中釋放出來，這會對細(xì)胞生長、細(xì)胞活力、轉(zhuǎn)染效率、蛋白質(zhì)表達產(chǎn)生負(fù)面影響，甚至模擬膿毒癥。為了解決這些問題，我們專為低內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNA 分離而設(shè)計的試劑盒能夠仔細(xì)去除這些內(nèi)毒素，有助于確保分離的質(zhì)粒 DNA 的完整性。這些試劑盒提供了一種快速簡便的質(zhì)粒純化方法，有助于為敏感的下游應(yīng)用提供高純度和高產(chǎn)量。無論您的制備規(guī)模是小還是大，我們的轉(zhuǎn)染級質(zhì)粒分離試劑盒都是根據(jù)您的特定需求量身定制的，使您能夠獲得可靠且可重復(fù)的結(jié)果。? 

高級轉(zhuǎn)染級質(zhì)粒 DNA 純化試劑盒 

對于需要更高水平去除內(nèi)毒素的科研人員，我們提供高級轉(zhuǎn)染級質(zhì)粒分離試劑盒。這些試劑盒超越了標(biāo)準(zhǔn)轉(zhuǎn)染級試劑盒，提供了更高的內(nèi)毒素去除水平，有助于確保分離的質(zhì)粒 DNA 的純度。使用我們高級轉(zhuǎn)染級質(zhì)粒分離試劑盒，您可以放心地執(zhí)行要求質(zhì)量 pDNA 的下游應(yīng)用。這些試劑盒非常適合從事關(guān)鍵實驗的研究人員，在這些實驗中，即使是微量內(nèi)毒素也會對其結(jié)果產(chǎn)生重大影響。使用我們的高級轉(zhuǎn)染級質(zhì)粒分離試劑盒可以幫助消除與內(nèi)毒素相關(guān)的風(fēng)險，獲取純質(zhì)粒 DNA，用于您的科學(xué)研究。 

分子級質(zhì)粒 DNA 純化試劑盒 

為實現(xiàn)快速、簡單和可靠的質(zhì)粒純化，我們的 Invitrogen PureLink 和 GeneJET 分子級質(zhì)粒 DNA（pDNA）分離試劑盒可生產(chǎn)與一系列標(biāo)準(zhǔn)分子生物學(xué)應(yīng)用兼容的即用型純質(zhì)粒。分子級試劑盒適用于細(xì)菌和酵母細(xì)胞的轉(zhuǎn)化；然而，由于存在內(nèi)毒素，可能不太適合敏感哺乳動物細(xì)胞的轉(zhuǎn)染。對于轉(zhuǎn)染應(yīng)用，請參見上述轉(zhuǎn)染級質(zhì)粒純化試劑盒。 

用于質(zhì)粒分離的其他緩沖液： 

· PureLink HiPure BAC 緩沖液試劑盒 

· PureLink Expi 無內(nèi)毒素緩沖液套裝 

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