酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）是一種廣泛應(yīng)用的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，用于定性和定量檢測(cè)生物樣品中的抗體或抗原。其原理是將抗原-抗體反應(yīng)的特異性與酶催化作用的高效性相結(jié)合，通過(guò)酶作用于底物后產(chǎn)生的顯色反應(yīng)來(lái)判定結(jié)果。ELISA檢測(cè)方法主要有四種類(lèi)型：直接法、間接法、雙抗體夾心法和競(jìng)爭(zhēng)法。

l 直接ELISA：這種類(lèi)型主要用于檢測(cè)抗原?？乖还潭ㄔ诿笜?biāo)板上，然后加入特異性抗體和酶標(biāo)記的二抗，通過(guò)底物顯色來(lái)檢測(cè)抗原的存在。直接ELISA操作簡(jiǎn)單，但信號(hào)放大效應(yīng)有限，敏感性不如其他類(lèi)型。

l 間接ELISA：這是檢測(cè)抗體的常用方法。

1、固相抗原包被：將已知抗原固定在酶標(biāo)板的孔中，形成固相抗原。

2、待測(cè)抗體結(jié)合：將待測(cè)樣本（含有待檢抗體）加入孔中，抗體與固相抗原結(jié)合。

3、洗板：洗滌以去除未結(jié)合的抗體。

4、加入酶標(biāo)二抗：加入酶標(biāo)記的二抗，該二抗能特異性結(jié)合到一抗上。

5、洗滌：再次洗滌以去除未結(jié)合的二抗。

6、底物顯色：加入酶作用的底物，底物在酶的作用下產(chǎn)生顏色變化。

7、結(jié)果讀取：通過(guò)酶標(biāo)儀在特定波長(zhǎng)下讀取OD值，OD值與待測(cè)抗體的量成正比。

l 雙抗夾心ELISA：這種類(lèi)型用于檢測(cè)抗原，通過(guò)兩種特異性抗體夾住待測(cè)抗原來(lái)進(jìn)行檢測(cè)。雖然理論上可以用來(lái)檢測(cè)抗體，但實(shí)際應(yīng)用中很少使用，因?yàn)橹苽鋬煞N特異性抗體的難度較大。

1、固相抗原包被：將已知抗原固定在酶標(biāo)板的孔中。

2、待測(cè)抗體結(jié)合：將待測(cè)樣本加入孔中，抗體與固相抗原結(jié)合。

3、洗滌：洗滌以去除未結(jié)合的抗體。

4、加入酶標(biāo)抗原：加入酶標(biāo)記的抗原，該抗原能特異性結(jié)合到待測(cè)抗體上。

5、洗滌：再次洗滌以去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗原。

6、底物顯色：加入酶作用的底物，底物在酶的作用下產(chǎn)生顏色變化。

7、結(jié)果讀?。和ㄟ^(guò)酶標(biāo)儀在特定波長(zhǎng)下讀取OD值，OD值與待測(cè)抗體的量成正比。

l 競(jìng)爭(zhēng)性ELISA：主要用于檢測(cè)抗原，通過(guò)固定抗原和競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合來(lái)實(shí)現(xiàn)檢測(cè)。這種方法的敏感性在低濃度待測(cè)抗原時(shí)可能不如間接ELISA。

1、固相抗原包被：將已知抗原固定在酶標(biāo)板的孔中。

待測(cè)抗體結(jié)合：將待測(cè)樣本加入孔中，抗體與固相抗原結(jié)合。

2、洗滌：洗滌以去除未結(jié)合的抗體。

3、加入酶標(biāo)抗原：加入酶標(biāo)記的抗原，該抗原能特異性結(jié)合到待測(cè)抗體上。

4、洗滌：再次洗滌以去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗原。

5、底物顯色：加入酶作用的底物，底物在酶的作用下產(chǎn)生顏色變化。

6、結(jié)果讀?。和ㄟ^(guò)酶標(biāo)儀在特定波長(zhǎng)下讀取OD值，OD值與待測(cè)抗體的量成正比。

ELISA的優(yōu)點(diǎn)包括操作簡(jiǎn)便、成本相對(duì)較低、適用于高通量檢測(cè)等。ELISA因其高特異性和靈敏度，廣泛應(yīng)用于臨床診斷、食品安全、藥物檢測(cè)等多個(gè)領(lǐng)域，是生物醫(yī)學(xué)研究中的重要工具。