百歐博偉生物：菌落總數(shù)檢測是評估樣品衛(wèi)生質量的重要指標，操作中需嚴格遵循無菌原則和標準化流程。以下是關鍵注意細節(jié)，分步驟說明：

一、樣品處理與稀釋

1、無菌操作

全程在超凈工作臺或生物安全柜中進行，穿戴無菌手套、口罩，避免人為污染。

樣品容器需滅菌，開封后立即檢測，防止環(huán)境微生物污染。

2、樣品均質

固體/半固體樣品：用滅菌均質袋或研磨器充分均質（如拍擊式均質器），確保細菌分布均勻。

液體樣品：搖勻后直接取樣，含顆粒物需過濾或再次均質。

3、稀釋液選擇與使用

使用0.85%生理鹽水或磷酸鹽緩沖液（pH 7.2），預先冷卻至0-4℃（抑制微生物增殖）。

每稀釋一次更換無菌吸管或槍頭，避免交叉污染。

稀釋順序：從低濃度到高濃度（如原液→10?1→10?2），避免誤差傳遞。

二、培養(yǎng)基制備與接種

1、培養(yǎng)基質量控制

選擇平板計數(shù)瓊脂（PCA）或其他標準培養(yǎng)基，滅菌后pH應為7.0±0.2。

滅菌后冷卻至45-50℃傾注，溫度過高會殺死微生物，過低易凝固不均。

2、傾注與混勻

每皿倒入15-20mL培養(yǎng)基，迅速旋轉平皿8-10次，確保樣品與培養(yǎng)基充分混合。

凝固后倒置培養(yǎng)，防止冷凝水浸潤菌落。

三、培養(yǎng)條件

1、溫度與時間

常規(guī)培養(yǎng)：36±1℃，48小時；部分標準需30℃培養(yǎng)72小時（如環(huán)境樣品）。

培養(yǎng)箱濕度維持60%-70%，避免培養(yǎng)基干燥。

2、擺放方式

平板倒置，單層擺放，留出空隙保證空氣流通，避免堆疊導致局部溫度不均。

四、菌落計數(shù)與記錄

1、計數(shù)規(guī)則

選擇菌落數(shù)30-300的平板（GB 4789.2標準），低于30記錄實際數(shù)，高于300記為“多不可計”。

多個稀釋度均符合范圍時，取平均值（如兩稀釋度菌落數(shù)均在30-300，按公式計算）。

2、區(qū)分干擾物

用放大鏡或菌落計數(shù)器輔助，排除氣泡、雜質；疑似蔓延菌落需標記說明。

若超過1/4平板被蔓延菌覆蓋，應重新檢測。

五、結果計算與報告

1、計算公式

2、有效數(shù)字與單位

結果保留兩位有效數(shù)字（如1.2×10? CFU/g），單位需明確（CFU/mL或CFU/g）。

六、質量控制

1、空白對照

每批次設空白對照（僅加稀釋液），若出現(xiàn)菌落需排查污染源。

2、陽性對照

使用已知菌株（如大腸埃希氏菌）驗證培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件有效性。

3、儀器校準

定期校準移液器、培養(yǎng)箱溫度計、均質器等，確保數(shù)據(jù)準確性。

七、安全與廢棄物處理

生物安全：潛在致病菌樣品需在生物安全二級實驗室處理。

廢棄物滅菌：使用后的培養(yǎng)基、樣品需121℃高壓滅菌30分鐘后再丟棄。

八、常見問題與解決

菌落過多/過少：檢查稀釋度選擇、培養(yǎng)基滅菌效果或樣品保存條件。

蔓延菌落：傾注后快速凝固，減少開蓋時間；使用含TTC的培養(yǎng)基抑制蔓延。

通過嚴格把控上述細節(jié)，可顯著提高檢測結果的準確性和重復性。實際操作中需結合具體標準靈活調(diào)整，確保合規(guī)性。

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