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國(guó)產(chǎn)激光共聚焦顯微鏡的核心在于利用激光作為光源，通過(guò)一系列精密光學(xué)組件實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品的高精度成像。激光束經(jīng)照明針孔后形成點(diǎn)光源，聚焦于樣品上的特定微小區(qū)域，激發(fā)樣品中的熒光分子發(fā)光。這些被激發(fā)出的熒光信號(hào)攜帶著樣品的結(jié)構(gòu)與成分信息，沿著原路返回，穿過(guò)物鏡、共聚焦針孔后，被光電探測(cè)器接收。
共聚焦針孔起著關(guān)鍵作用，只允許來(lái)自焦平面上那一點(diǎn)光信號(hào)通過(guò)，而偏離焦平面的光信號(hào)則被阻擋。這樣一來(lái)，通過(guò)逐點(diǎn)掃描樣品，就能獲取不同層面的清晰圖像。計(jì)算機(jī)系統(tǒng)會(huì)對(duì)這些掃描數(shù)據(jù)進(jìn)行處理與整合，構(gòu)建出樣品的三維立體圖像，讓研究者能直觀洞察樣品內(nèi)部的微觀結(jié)構(gòu)與動(dòng)態(tài)變化。
國(guó)產(chǎn)激光共聚焦顯微鏡的測(cè)定步驟：
1.開(kāi)機(jī)準(zhǔn)備：
-按順序打開(kāi)總電源、顯微鏡控制器、激光器等設(shè)備，最后啟動(dòng)電腦和相應(yīng)操作軟件。
-等待硬件自檢完成，確保儀器狀態(tài)正常。
2.樣品放置與觀察：
-將制備好的熒光標(biāo)記樣品(如細(xì)胞、組織切片)置于載玻片或?qū)Ｓ门囵B(yǎng)皿中，蓋玻片厚度需≤0.17mm。
-在明場(chǎng)模式下調(diào)整物鏡(如2.5x、10x低倍鏡)找到樣品位置，切換至熒光模式(RL)觀察熒光分布。
3.參數(shù)設(shè)置：
-激發(fā)與檢測(cè)配置：根據(jù)熒光探針的激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)選擇激光光源、濾光片及探測(cè)器通道。
-掃描模式：選擇點(diǎn)、線、面或3D掃描方式，設(shè)置分辨率(如1024×1024)和掃描速度。
-光學(xué)參數(shù)：調(diào)節(jié)針孔大小(通常1AU)、激光強(qiáng)度、增益值(Gain<800)以避免過(guò)曝。
4.圖像采集：
-使用“Smart Setup”添加通道并選擇信號(hào)模式(如Best Signal模式避免串色)。
-設(shè)置掃描范圍(Scan Area)、層掃間距(Z-Stack)或時(shí)間序列參數(shù)(Time-Series)。
-點(diǎn)擊“Live”實(shí)時(shí)觀察，調(diào)整焦平面后保存圖像(格式如CZI或TIFF)。
5.關(guān)機(jī)維護(hù)：
-按開(kāi)機(jī)反向順序關(guān)閉軟件、激光器、電源，注意鹵化燈關(guān)閉后30分鐘內(nèi)勿重啟。
-清潔物鏡(油鏡需擦拭干凈)，確保無(wú)殘留油污或熒光染料。
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