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Temsirolimus

MCE 國際站：Temsirolimus

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號(hào)：HY-50910

CAS：162635-04-3

中文名稱：替西羅莫司

Synonyms：替西羅莫司; CCI-779

純度：99.56%

存儲(chǔ)條件：4°C，避光，氮?dú)獗４?*溶劑中：-80°C，1 年；-20°C，6 個(gè)月（避光，氮?dú)獗４妫?/p>

運(yùn)輸條件：美國大陸的室溫；其他地方可能有所不同。

產(chǎn)品活性：Temsirolimus 是 mTOR 抑制劑，IC50 值為 1.76 μM。Temsirolimus 能激活自噬 (autophagy),在動(dòng)物模型中防止心臟功能惡化。

生物活性：Temsirolimus 是 mTOR 的抑制劑，IC₅₀ 為 1.76 μM。 Temsirolimus 在動(dòng)物模型中激活自噬 并防止心臟功能惡化^[8]。 IC50 和靶標(biāo)：IC50：1.76 μM (mTOR) 體外替西羅莫司有效抑制 mTOR 激酶活性，IC₅₀ 為 1.76 μM，類似于在不存在 FKBP12 的情況下，雷帕霉素的 IC₅₀ 為 1.74 μM。 Temsirolimus（10 nM 至<5 μM）通過 FKBP12 依賴性機(jī)制顯示適度和選擇性的抗增殖活性，但可以在低微摩爾濃度（5-15 μM）下完-全抑制大量腫瘤細(xì)胞的增殖，涉及 FKBP12 非依賴性抑制 mTOR 信號(hào)。微摩爾而不是納摩爾濃度 (20 μM) 的替西羅莫司處理導(dǎo)致整體蛋白質(zhì)合成和多核糖體分解的顯著下降，同時(shí)翻譯延伸因子 eEF2 和翻譯起始因子 eIF2A 的磷酸化迅速增加^{[1]< /sup>.?Temsirolimus 抑制核糖體蛋白 S6 的磷酸化，在 PTEN 陽性 DU145 細(xì)胞中比在 PTEN 陰性 PC-3 細(xì)胞中更有效，并以濃度依賴性方式抑制兩種細(xì)胞的細(xì)胞生長和克隆形成存活[2].?Temsirolimus (100 ng/mL) 有效抑制原代人淋巴細(xì)胞白血病 (ALL) 細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[3]。 體內(nèi) CCI-779（20 mg/kg，腹腔注射）抑制兩種前列腺癌異種移植物的生長，PC-3 腫瘤的生長在一定劑量下受到抑制-依賴性方式和生長抑制大于 DU145 腫瘤[2]。在具有人類 ALL 的 NOD/SCID 異種移植模型中，坦西羅莫司以 10 mg/kg/天的劑量進(jìn)行治療可減少外周血母細(xì)胞和脾腫大[3]。?給予坦西羅莫司（20 mg/kg , ip 5 天/周）與對(duì)照組相比，DAOY 異種移植物的生長在 1 周后顯著延遲 160%，在 2 周后延遲 240%。單次大劑量 Temsirolimus (100 mg/kg, ip) 治療可在 1 周內(nèi)誘導(dǎo) 37% 的腫瘤體積消退。 Temsirolimus 治療 2 周還將抗雷帕霉素 U251 異種移植物的生長延遲 148%[4]。在小鼠模型中，Temsirolimus 對(duì) mTOR 的抑制提高了四種不同行為任務(wù)的表現(xiàn)并減少了聚集體形成亨廷頓病[5]。?給予替西羅莫司誘導(dǎo)顯著的劑量依賴性抗腫瘤反應(yīng)，對(duì)抗 8226、OPM-2 和 U266 異種移植物的皮下生長，ED₅₀ 為8226 和 OPM-2 分別為 20 mg/kg 和 2 mg/kg，它們與抑制增殖和血管生成、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和縮小腫瘤細(xì)胞大小有關(guān)[6]。}

體外：Temsirolimus 有效抑制 mTOR 激酶活性，IC50 為 1.76 μM，類似于 Rapamycin 在沒有 FKBP12 的情況下 IC50 為 1.74 μM。Temsirolimus (10 nM 至 mTOR 信號(hào)。微摩爾而不是納摩爾濃度 (20 μM) 的 Temsirolimus 處理導(dǎo)致整體蛋白質(zhì)合成和多核糖體分解的顯著下降，同時(shí)翻譯延伸因子 eEF2 和翻譯起始因子 eIF2A 的磷酸化迅速增加[1]。Temsirolimus 抑制核糖體蛋白 S6 的磷酸化，在 PTEN 陽性 DU145 細(xì)胞中比在 PTEN 陰性 PC-3 細(xì)胞中更有效，并以濃度依賴性方式抑制兩種細(xì)胞的細(xì)胞生長和克隆形成存活[2]。Temsirolimus (100 ng/mL) 有效抑制原代人淋巴細(xì)胞白血病 (ALL) 細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[3]。 MCE尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。僅供參考。

體內(nèi)：CCI-779 (20 mg/kg，腹腔注射) 抑制兩種前列腺癌異種移植物的生長，PC-3 腫瘤的生長以劑量依賴性方式受到抑制，并且生長抑制作用大于 DU145 腫瘤[2]。在具有人 ALL 的 NOD/SCID 異種移植模型中，10 mg/kg/天的 Temsirolimus 處理導(dǎo)致外周血母細(xì)胞減少和脾腫大[3]。與對(duì)照組相比，Temsirolimus (20 mg/kg，ip 5 天/周) 給藥后 1 周后 DAOY 異種移植物的生長顯著延遲 160%，2 周后延遲 240%。單次大劑量 Temsirolimus (100 mg/kg，ip) 處理可在 1 周內(nèi)誘導(dǎo) 37% 的腫瘤體積消退。Temsirolimus 處理 2 周還將耐雷帕霉素 U251 異種移植物的生長延遲了 148%[4]。在亨廷頓病小鼠模型中，Temsirolimus 對(duì) mTOR 的抑制可提高四種不同行為任務(wù)的表現(xiàn)并減少聚集體形成[5]。給藥 Temsirolimus 可誘導(dǎo)顯著的劑量依賴性抗腫瘤反應(yīng)，對(duì)抗 8226、OPM-2 和 U266 異種移植物的皮下生長，8226 和 OPM-2 的 ED50 分別為 20 mg/kg 和 2 mg/kg，它們分別與抑制增殖和血管生成、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和縮小腫瘤細(xì)胞大小有關(guān)[6]。 MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：為了生成異種移植，將細(xì)胞植入基質(zhì)膠中；基質(zhì)膠儲(chǔ)存在 ?20°C 下，然后在使用前在 4°C 的冰上解凍 3 小時(shí)。將細(xì)胞輕輕懸浮在 1 mL PBS 中，并在冰上孵育 5 分鐘。使用預(yù)冷的移液器將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有 1 mL 基質(zhì)膠的管中，并將細(xì)胞濃度調(diào)整為 3×107/mL。使用 25 號(hào)針頭將細(xì)胞（0.1 mL 中 3×106）皮下注射到小鼠的兩側(cè)。當(dāng)異種移植長到直徑約 5 毫米時(shí)，將動(dòng)物隨機(jī)分成 10 只小鼠組。進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)：攜帶 PC-3 腫瘤的小鼠每周 3 或 5 天接受 CCI-779（每天每公斤 1、5、10 和 20 毫克）或載體溶液治療，持續(xù) 3 周。 DU145 腫瘤小鼠僅接受 CCI-779（20 mg/kg/天）或載體溶液治療 3 周。PC-3 腫瘤小鼠接受以下治療：(a) 對(duì)照，CCI-779 載體溶液；(b) 單獨(dú)化療，每周腹腔注射米托蒽醌 1.5 mg/kg 或多西他賽 10 mg/kg，共 3 次；(c) 單獨(dú) CCI-779，每天腹腔注射 5 或 10 mg/kg，每周 3 次，共 3 周；(4) 化療后接受 CCI-779。MCE 尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：集落形成試驗(yàn)還用于確定前列腺癌細(xì)胞在接受各種治療后的存活率。將呈指數(shù)增長的細(xì)胞暴露于不同劑量的米托蒽醌或多西他賽 24 小時(shí)，或暴露于 CCI-779 3 天。處理后，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行清洗和胰蛋白酶消化。將連續(xù)稀釋的細(xì)胞接種到 6 孔板中的 5 mL 培養(yǎng)基中。將培養(yǎng)板在 37°C 下、濕度為 90% 且含有 5% CO2 的空氣中孵育 10 天。然后用亞甲藍(lán)對(duì)培養(yǎng)板進(jìn)行染色，并計(jì)數(shù)含有 >50 個(gè)細(xì)胞的集落。MCE 尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。

激酶實(shí)驗(yàn)：將 Flag 標(biāo)記的野生型人類 mTOR (Flag-mTOR) DNA 構(gòu)建體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染到 HEK293 細(xì)胞中。48 小時(shí)后進(jìn)行 Flag-mTOR 的蛋白質(zhì)提取和純化。在 96 孔板中，在不同濃度的不含 FKBP12 的 Temsirolimus 存在下對(duì)純化的 Flag-mTOR 進(jìn)行體外激酶測定，并使用 His6-S6K1 作為底物通過解離增強(qiáng)鑭系熒光免疫測定 (DELFIA) 進(jìn)行檢測。首先將酶稀釋在激酶測定緩沖液中（10 mM Hepes（pH 7.4）、50 mM NaCl、50 mM β-甘油磷酸、10 mM MnCl2、0.5 mM DTT、0.25 μM 微囊藻毒素 LR 和 100 μg/mL BSA）。將 12 μL 稀釋酶與 0.5 μL Temsirolimus 短暫混合到每個(gè)孔中。通過添加 12.5 μL 含有 ATP 和 His6-S6K 的激酶分析緩沖液來啟動(dòng)激酶反應(yīng)，最終反應(yīng)體積為 25 μL，其中含有 800 ng/mL FLAG-mTOR、100 μM ATP 和 1.25 μM His6-S6K。將反應(yīng)板在室溫下輕輕搖動(dòng)孵育 2 小時(shí)（1-6 小時(shí)呈線性），然后通過添加 25 μL 終止緩沖液（20 mM Hepes（pH 7.4）、20 mM EDTA 和 20 mM EGTA）來終止反應(yīng)。在室溫下使用標(biāo)記有銪-N1-ITC (Eu) 的單克隆抗 P(T389)-p70S6K 抗體（每個(gè)抗體 10.4 Eu）對(duì)磷酸化 (Thr-389) His6-S6K 進(jìn)行 DELFIA 檢測。將 45 μL 終止激酶反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移到含有 55 μL PBS 的 MaxiSorp 板中。讓 His6-S6K 附著 2 小時(shí)，然后抽吸孔并用 PBS 清洗一次。加入 100 μL 含有 40 ng/mL Eu-P(T389)-S6K 抗體的 DELFIA 緩沖液。在輕輕攪拌下繼續(xù)抗體結(jié)合 1 小時(shí)。然后抽吸孔并用含有 0.05% Tween 20 (PBST) 的 PBS 清洗四次。每孔加入 100 μL DELFIA 增強(qiáng)溶液，然后使用 PerkinElmer Victor 型號(hào)的讀板機(jī)讀取板內(nèi)數(shù)據(jù)。MCE 尚未獨(dú)立確認(rèn)這些方法的準(zhǔn)確性。僅供參考。

IC50 & Target：mTOR 1.76 μM (IC50)

熱-銷產(chǎn)品：Carubicin (hydrochloride)  | SBI-553  | Fomc-Gly-Gly-Phe-Gly-OH  | TSQ  | Mitoxantrone (dihydrochloride)

Trending products：Recombinant Proteins  |  Natural Products  |  Fluorescent Dye  |  PROTAC  |   Oligonucleotides

參考文獻(xiàn)：

[1]. Shor B, et al. A new pharmacologic action of CCI-779 involves FKBP12-independent inhibition of mTOR kinase activity and profound repression of global protein synthesis. Cancer Res, 2008, 68(8), 2934-2943.
[2]. Wu L, et al. Effects of the mammalian target of rapamycin inhibitor CCI-779 used alone or with chemotherapy on human prostate cancer cells and xenografts. Cancer Res, 2005, 65(7), 2825-2831.
[3]. Teachey DT, et al. The mTOR inhibitor CCI-779 induces apoptosis and inhibits growth in preclinical models of primary adult human ALL. Blood, 2006, 107(3), 1149-1155.
[4]. Geoerger B, et al. Antitumor activity of the rapamycin analog CCI-779 in human primitive neuroectodermal tumor/medulloblastoma models as single agent and in combination chemotherapy. Cancer Res, 2001, 61(4), 1527-1532.
[5]. Ravikumar B, et al. Inhibition of mTOR induces autophagy and reduces toxicity of polyglutamine expansions in fly and mouse models of Huntington disease. Nat Genet. 2004 Jun;36(6):585-95. Epub 2004 May 16.
[6]. Frost P, et al. In vivo antitumor effects of the mTOR inhibitor CCI-779 against human multiple myeloma cells in a xenograft model. Blood. 2004 Dec 15;104(13):4181-7. Epub 2004 Aug 10.
[7]. Dela Cruz FS, et al. A case study of an integrative genomic and experimental therapeutic approach for rare tumors: identification of vulnerabilities in a pediatric poorly differentiated carcinoma. Genome Med. 2016 Oct 31;8(1):116.
[8]. Jason C. Choi, et al. Temsirolimus activates autophagy and ameliorates cardiomyopathy caused by lamin A/C gene mutation. Sci Transl Med. 2012 Jul 25; 4(144): 144ra102.