研究重組人腫瘤壞死因子（rHTNF）與γ-干擾素（IFN-γ）協(xié)同抗膀胱腫瘤的作用機(jī)理，探索治療膀胱腫瘤的新方法。

　　材料與方法　人膀胱腫瘤細(xì)胞株BIU-87由北京醫(yī)科大學(xué)泌尿外科研究所提供。（1）用MTT法^[1]測(cè)定rHTNF或IFN-γ，以及在單獨(dú)應(yīng)用和聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，在不同藥物濃度及不同作用時(shí)間內(nèi)對(duì)BIU-87細(xì)胞的zui大殺傷率。酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度A值。殺傷率（%）=（對(duì)照孔A值-實(shí)驗(yàn)孔A值）/對(duì)照孔A值×100%。（2）對(duì)經(jīng)過(guò)IFN-γ（0.15μg/ml）作用6小時(shí)與未經(jīng)IFN-γ作用的對(duì)照組BIU-87細(xì)胞，分別行放射配體結(jié)合時(shí)間、解離和特異性競(jìng)爭(zhēng)試驗(yàn)，通過(guò)Scatchard圖計(jì)算受體數(shù)目及親和力，進(jìn)行rHTNF受體分析，觀(guān)察IFN-γ對(duì)TNF受體的影響。（3）IFN-γ對(duì)rHTNF內(nèi)化率和降解率的影響：經(jīng)IFN-γ作用6小時(shí)和未經(jīng)IFN-γ作用的BIU-87細(xì)胞分別與¹²⁵I-rHTNF于37℃反應(yīng)3小時(shí)后，離心沉淀細(xì)胞。將細(xì)胞懸浮于0.1mmol/L、pH 3.0的甘酸-鹽酸緩沖液中，洗掉結(jié)合在細(xì)胞膜上的¹²⁵I-TNF，測(cè)定細(xì)胞內(nèi)剩余的放射性，作為內(nèi)化量。50%的三氯醋酸可溶解¹²⁵I-rHTNF降解產(chǎn)物，同時(shí)沉淀未降解的¹²⁵I-rHTNF，溶液中的放射性即代表¹²⁵I-rHTNF的降解量。然后計(jì)算細(xì)胞內(nèi)¹²⁵I-rHTNF與細(xì)胞zui大結(jié)合¹²⁵I-rHTNF的比值作為內(nèi)化率；50%三氯醋酸溶液中的放射性與內(nèi)化放射性的比值即為降解率。

　　結(jié)　果　（1）rHTNF和IFN-γ單獨(dú)應(yīng)用時(shí)對(duì)BIU-87細(xì)胞的zui大殺傷率分別為61%和15%，兩者聯(lián)合應(yīng)用時(shí)對(duì)BIU-87細(xì)胞的zui大殺傷率達(dá)89%，明顯高于rHTNF單獨(dú)應(yīng)用時(shí)對(duì)BIU-87細(xì)胞的zui大殺傷率（P＜0.05）。（2）¹²⁵ I-rHTNF與BIU-87細(xì)胞于37℃反應(yīng)3小時(shí)可達(dá)平衡狀態(tài)。解離曲線(xiàn)表明該反應(yīng)呈可逆性。非標(biāo)記的rHTNF可競(jìng)爭(zhēng)性抑制¹²⁵ I-rHTNF與BIU-87細(xì)胞的結(jié)合。IFN-γ對(duì)該結(jié)合試驗(yàn)無(wú)抑制作用。IFN-γ使BIU-87細(xì)胞表面受體數(shù)量由0.41×10^-11nmol/細(xì)胞增加至0.92×10^-11nmol/細(xì)胞，對(duì)受體的親和力無(wú)顯著影響。（3）IFN-γ可顯著提高BIU-87細(xì)胞對(duì)¹²⁵I-rHTNF的內(nèi)化和降解的量，但對(duì)內(nèi)化率和降解率無(wú)顯著影響。

　　討　論　TNF由激活的單核巨噬細(xì)胞和活化的T淋巴細(xì)胞及部分腫瘤細(xì)胞分泌，具有多種生物活性，是迄今發(fā)現(xiàn)的抗腫瘤活性zui強(qiáng)的細(xì)胞因子，其可能成為有一定臨床應(yīng)用價(jià)值的抗癌生物制劑。不同類(lèi)型腫瘤細(xì)胞顯示對(duì)TNF不同的反應(yīng)：細(xì)胞毒性、生長(zhǎng)抑制及無(wú)作用；甚至同一種類(lèi)型細(xì)胞的不同細(xì)胞株對(duì)TNF作用亦表現(xiàn)出不同的反應(yīng)。一般認(rèn)為耐受TNF的腫瘤細(xì)胞能產(chǎn)生小劑量的內(nèi)源性TNF，內(nèi)源性TNF通過(guò)誘導(dǎo)保護(hù)性蛋白的產(chǎn)生，減弱TNF對(duì)腫瘤細(xì)胞的毒性^［2］。本研究結(jié)果表明，rHTNF對(duì)膀胱腫瘤細(xì)胞株BIU-87的zui大殺傷率為61%。IFN-γ和TNF對(duì)許多腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制有協(xié)同作用，作用機(jī)制尚不清楚。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)IFN-γ和rHTNF對(duì)BIU-87細(xì)胞的殺傷亦有協(xié)同作用，其zui大殺傷率可達(dá)89%。其協(xié)同作用可能部分與INF-γ增加BIU-87細(xì)胞表面的rHTNF受體表達(dá)有關(guān)。

　　TNF嚴(yán)重的毒副作用限制了臨床應(yīng)用。目前已經(jīng)有幾種TNF衍生物研制成功。本研究提示：TNF局部用藥是合理的，同時(shí)選擇毒副作用較輕的TNF衍生物與IFN-γ等與其協(xié)同抗腫瘤作用的細(xì)胞因子應(yīng)用，可在一定程度上減輕TNF的毒副反應(yīng)。