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羊胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2,羊ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)性質(zhì)及操作

來源:上海滬宇ELISA試劑盒廠家   2012年10月25日 11:49  

羊elisa試劑盒檢測(cè)步驟: 在使用前,將所有試劑和樣品室溫。再次離心樣品解凍后測(cè)定前。據(jù)建議,所有樣品和標(biāo)準(zhǔn)來測(cè)定一式兩份。
1。準(zhǔn)備好所有試劑,工作標(biāo)準(zhǔn)和樣品在前面的章節(jié)中。
2。請(qǐng)確定井?dāng)?shù)的使用,并把任何剩余的井和入袋干燥劑,密封保鮮袋,將未使用的井在4°C的含量布局表
。每孔加入100μl的標(biāo)準(zhǔn)和樣品。封面用膠粘帶提供。孵育2小時(shí),在37℃下 一盤布局記錄標(biāo)準(zhǔn)和樣品檢測(cè)。
4。每孔中取出的液體,不洗。
5。向每孔中加入100μl生物素抗體(1倍)。蓋上一個(gè)新的膠粘帶。孵育1小時(shí),在37℃下 (生物素抗體(1X)可能會(huì)出現(xiàn)混濁。預(yù)熱至室溫,輕輕混勻,直到出現(xiàn)均勻解決方案。)
6。吸液的各孔和洗滌,共洗滌三次重復(fù)該過程兩次。洗凈,每孔填充洗滌緩沖液(200μL)使用噴瓶,多道移液器,歧管器,或autowasher,和,靜置2分鐘,*清除液體的每一步是*的良好的性能。zui后一次洗滌后,清除任何剩余洗滌緩沖液的吸ordecanting。倒置板和涂抹對(duì)干凈的紙巾。
7。向每孔中加入100μl的HRP-抗生物素蛋白(1×)。量的微量滴定板,用一個(gè)新的粘接劑條。溫育1小時(shí),在37℃下
8。重復(fù)的愿望/洗滌過 ??程中,在步驟6的5倍。
9。將90μlTMB底物添加到每個(gè)孔中。孵育15-30分鐘,在37℃下 避光
10。一站式解決方案,每孔加入底物,輕輕晃動(dòng)酶標(biāo)板,以確保充分混合。
11。在5分鐘內(nèi),設(shè)置至450nm,使用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔的光密度。如果波長(zhǎng)校正,設(shè)置為540 nm或570 nm處。在540 nm或570 nm波長(zhǎng)在450 nm處的讀數(shù)減去讀數(shù)。該減法校正板的光學(xué)缺陷。在450 nm處未經(jīng)修正讀數(shù)直接,可能會(huì)比較高,不太準(zhǔn)確。

特異性: 此法具有靈敏度高,特異性好,檢測(cè)羊IGFBP2。并無重大交叉反應(yīng)或羊的IGFBP2及類似物之間的干擾進(jìn)行了觀察。
精密度: 批內(nèi)精密度(內(nèi)檢測(cè)精度):CV%<8%
三種已知濃度的樣品進(jìn)行了測(cè)試20次在一個(gè)平板上進(jìn)行評(píng)估。
間精密度(精密檢測(cè)間):CV%<10%
已知的三個(gè)樣本20檢測(cè)到的濃度進(jìn)行了測(cè)試評(píng)估。

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