微量血鋅正常參考值的測定|檢測|分析方法

-------------火焰原子吸收法

南京科捷分析儀器有限公司駐華南辦事處

在我國鋅缺乏現(xiàn)象相當普遍。血清鋅濃度測定是當前*的鋅缺乏診斷試驗。如果能夠排除感染、發(fā)燒、創(chuàng)傷等應激反應,血清鋅測定值可以反映體內(nèi)鋅總體水平。但這種方法用血量較多,兒童及其家長不愿接受。頭發(fā)鋅含量測定曾作為診斷鋅缺乏的常用方法。頭發(fā)樣品的采集、運送、貯存、檢測都較方便,易為兒童及其家長所接受。但洪昭毅等曾同時測定467例小兒血清和頭發(fā)鋅含量,結(jié)果顯示二者無相關(guān)性。頭發(fā)鋅含量測定只能作為群體營養(yǎng)狀況及環(huán)境污染的監(jiān)測指標,不能作為鋅缺乏的診斷指標。近年來,有學者相繼探索微量、簡易、快捷、靈敏、可靠的鋅缺乏診斷方法。本室將有關(guān)報道加以綜合、改進,建立了高靈敏微量進樣火焰原子吸收法測定微量全血鋅的方法,并應用該方法進行中國公共衛(wèi)生專項調(diào)查,以期制訂正常參考值?，F(xiàn)報告如下：

1 　對象與方法（微量血鋅正常參考值的測定|檢測|分析方法）

 1.1 　對象　江西醫(yī)學院護理系一年級120名女生,平均年齡18.6 歲,zui小年齡17歲（16人） ,zui大年齡21歲（2 人） 。采血時皆無感染發(fā)燒等急性病表現(xiàn),亦無嚴重慢性疾病。
    1.2 　方法　
    1.2.1 　靜脈血采集　于早晨空腹時采集,血樣離心分離血清,置冰箱備測。
    1.2.2 　全血樣采集　于采靜脈血的同時,用一次性毛細管取同一人指端未稍血20μl注入盛有1ml稀釋液的聚乙烯塑料管中,并將附于毛細管壁的血洗凈,加蓋封緊置冰箱備測。
    1.2.3 　稀釋液及標準液配制　配制0.1 %TritonX-100水溶液,用于稀釋血樣,并起增敏和抗干擾作用。用純ZnO配制濃度為1000mg/L的Zn標準儲備液（含0.1mol/ LHNO3） ,放于冰箱備用。測試前用0.05 %TritonX-100 逐級稀釋配制標準工作液。
    1.2.4 　儀器測定條件（微量血鋅正常參考值的測定|檢測|分析方法）

1.2.5 　測定方法　

（1） 血清鋅測定:取靜脈血離心分離血清。取血清1ml加0.1mol/ L HNO34 ml混勻。將儀器按1.2.4 （1）所述條件設定調(diào)試好。用重蒸餾水調(diào)零。將空白液及系列標準液依次噴入火焰,記錄吸光度,繪制標準曲線。再將樣品噴入火焰,記錄吸光度,從標準曲線上查得待測樣品的濃度。
    （2） 微量全血鋅測定:向盛有全血的聚乙烯管中加入測試稀釋液1 ml ,搖勻上機測試。即按選定的儀器測定參數(shù),分別將標準溶液和試樣溶液直接噴霧測定吸光度。標準溶液（標準工作液系列） 濃度為:0 ,50 ,100 ,150 ,200μg/ L 。曲線繪制及結(jié)果計算由儀器配套計算機自動完成。
    1.2.6 　確定正常參考值的方法　在比較均數(shù)加減標準差法與百分位數(shù)法的基礎上,從診斷實際出發(fā)制訂正常參考值。
    2 　結(jié)　果（微量血鋅正常參考值的測定|檢測|分析方法）
    2.1 　血清鋅及全血鋅測量值　樣本量為120例。血清鋅均數(shù)為11.9μmol/ L ,標準差為3.49 ,中位數(shù)為11.50 。全血鋅均數(shù)為66.54μmol/ L ,標準差為8.52 ,中位數(shù)為67.60μmol/L 。第5 百分位血清鋅值為7.36μmol/ L , 30 百分位數(shù)為9.50 ; 40 百分位數(shù)為10.42 ; 5 百分位全血鋅值為50.48μmol/ L ,30 百分位數(shù)為62.48 ;40 百分位為64.94 。
    2.2 　分布檢驗　血清鋅測量值呈正偏態(tài)尖峭峰分布。全血鋅測量值呈負偏態(tài)尖峭峰分布。
    2.3 　火焰原子吸收光譜法測定微量全血鋅的靈敏度與特異度　以火焰原子吸收光譜法所得血清鋅測定值作為“金標準”,即血清鋅測定法判斷為陽性者屬于真陽性（病人） 評價火焰原子吸收光譜法測定微量全血鋅（簡稱微量全血鋅測定法）的靈敏度與特異度。當血清鋅測定法陽性（鋅缺乏） 判斷標準為9.50μmol/ L ,微量全血鋅測定法陽性（鋅缺乏）判斷標準為62.50μmol/L時, 后者的靈敏度為82.05% ,特異度為87.65 %。當血清鋅測定法陽性判斷標準為10.10μmol/ L ,微量全血鋅測定法陽性判斷標準為64.30μmol/ L時,后者的靈敏度為92.50 % , 特異度為87.5 % , 假陰性率（漏診率） 僅7.5 % ,假陽性率（誤診率） 僅12.5%。當血清鋅測定法陽性判斷標準為10.42μmol/ L ,微量全血鋅測定法陽性判斷標準為64.94μmol/ L時,后者的靈敏度降為87.8 % ,特異度降為86.07 %。
    3 　討　論（微量血鋅正常參考值的測定|檢測|分析方法）
    正常參考值的常用表示方法是均數(shù)加減標準差法。應用該表示方法的前提是,諸測量數(shù)據(jù)的頻數(shù)分布呈正態(tài)。如前所述,微量全血鋅測定法諸測量數(shù)據(jù)呈偏態(tài)分布。此外,應用這種表示方法都假定患病率為5 % ,這與實際情況不符。正常參考值的另一常用表示方法是百分位數(shù)法。這種表示方法同樣假定鋅缺乏患病率為5 %。我們應用這一標準在人群中進行鋅缺乏篩選,其結(jié)果與臨床表現(xiàn)的符合率很低。所以這兩種方法均不適用于制訂全血鋅的正常參考值。
    根據(jù)文獻資料和實驗,取第30百分位數(shù)血清鋅測量值作為陽性分界值即“金標準”,評價第30 百分位數(shù)微量全血鋅測量值（待評價標準） 的靈敏度和特異度。結(jié)果顯示,靈敏度為82.05 % , 特異度為87.65 %。將待評價標準改為64.30μmol/ L , 則靈敏度提高至92.50 %（ 漏診率僅為7.50 %） ,特異度（ 87.50 %）仍處于較高水平, 誤診率僅12.5 %。若將待評價指標改為第40 百分位數(shù)測量值64.94μmol/L ,則靈敏度降至87.80 % ,特異度降至86.07 %。所以,火焰原子吸收光譜法測定微量全血鋅其正常參考值下限應訂為64.30μmol/ L 。

微量血鋅正常參考值的測定方法—火焰原子吸收法

微量血鋅正常參考值的檢測方法—火焰原子吸收法

微量血鋅正常參考值的分析方法—火焰原子吸收法