三碘甲狀腺素T3抗體，Anti-T3上海安研現(xiàn)貨直銷(xiāo)，免費(fèi)快遞送貨上門(mén)DNA拓普西異構(gòu)酶Ⅱ抗體，Anti-DNA TPⅡα規(guī)格：100ug  200ug產(chǎn)品類(lèi)型  一抗   產(chǎn)品價(jià)格：電詢(xún)    保存： Store at -20 ° 產(chǎn)品用途：科研實(shí)驗(yàn) （ Not yet tested in other applications.Optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user沒(méi)有在其他方面應(yīng)用的測(cè)試,*稀釋濃度取決于用戶(hù)） 

本公司長(zhǎng)期供應(yīng)免疫組化抗體、WB抗體、免疫組化試劑盒和抗體試驗(yàn)所需全部相關(guān)試劑、熒光標(biāo)記抗體、elisa抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、各種標(biāo)記的二抗IgG/IgM/IgD/IgA等科研實(shí)驗(yàn)抗體。

三碘甲狀腺素T3抗體，Anti-T3雜交瘤的克隆化

　　雜交瘤克隆化一般是指將抗體陽(yáng)性孔進(jìn)行克隆化。因?yàn)榻?jīng)過(guò)HAT篩選后的雜交瘤克隆不能保證一個(gè)孔內(nèi)只有一個(gè)克隆。在實(shí)際工作中，可能會(huì)有數(shù)個(gè)甚至更多的克隆，可能包括抗體分泌細(xì)胞、抗體非分泌細(xì)胞、所需要的抗體（特異性抗體）分泌細(xì)胞和其它無(wú)關(guān)抗體的分泌細(xì)胞。要想將這些細(xì)胞彼此分開(kāi)就需要克隆化?？寺』脑瓌t是，對(duì)于檢測(cè)抗體陽(yáng)性的雜交克隆盡早進(jìn)行克隆化，否則抗體分泌的細(xì)胞會(huì)被抗體非分泌的細(xì)胞所抑制，因?yàn)榭贵w非分泌細(xì)胞的生長(zhǎng)速度比抗體分泌的細(xì)胞生長(zhǎng)速度快，二者競(jìng)爭(zhēng)的結(jié)果會(huì)使抗體分泌的細(xì)胞丟失。即使克隆化過(guò)的雜交瘤細(xì)胞也需要定期的再克隆，以防止雜交瘤細(xì)胞的突變或染色體丟失，從而喪失產(chǎn)生抗體的能力。

　　克隆化的方法很多，zui常用的是有限稀釋法和軟瓊脂平板法。

　　1．有限稀釋法克隆

　?。?）克隆前1天制備飼養(yǎng)細(xì)胞層（同細(xì)胞融合）。

　　2）將要克隆的雜交瘤細(xì)胞從培養(yǎng)孔內(nèi)輕輕吹干，計(jì)數(shù)。

　?。?）調(diào)整細(xì)胞為3～10個(gè)細(xì)胞/ml。

　?。?）取頭天準(zhǔn)備的飼養(yǎng)細(xì)胞層的細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔加入稀釋細(xì)胞100μl。孵育于37℃、5%CO2孵箱中 。

　?。?）在第7天換液，以后每2～3天換液1次。

　?。?）8～9天可見(jiàn) 細(xì)胞克隆形成，及時(shí)檢測(cè)抗體活性。

　?。?）將陽(yáng)性孔的細(xì)胞移至24孔板中擴(kuò)大培養(yǎng)。

　　（8）每個(gè)克隆應(yīng)盡快凍存。

　　2．軟瓊脂培養(yǎng)法克隆

　?。?）軟瓊脂的配制：含有20%NCS（小牛血清）的2倍濃縮的RPMI1640。

　?、?%瓊脂水溶液：高壓滅菌，42℃預(yù)熱。

　　②0.5%瓊脂：由1份1%瓊脂加1份含20%小牛血清的2倍濃縮的RPMI1640配制而成。置42℃保溫。

　?。?）用上述0.5%瓊脂液（含有飼養(yǎng)細(xì)胞）15ml傾注于直徑為9cm的平皿中，在室溫中待凝固后作為基底層備用。

　　（3）按100/ml，500/ml或5000/ml等濃度配制需克隆的細(xì)胞懸液。

　?。?）1ml 0.5%瓊脂液（42℃預(yù)熱）在室溫中分別與1ml不同濃度的細(xì)胞懸液相混合。

　?。?）混勻后立傾注于瓊脂基底層上，在室溫中10min，使其凝固，孵育于37℃、5%CO2孵箱中。

　　（6）4～5天 后即可見(jiàn)針尖大小白色克隆，7～10天后，直接移種至含飼養(yǎng)細(xì)胞的24孔中進(jìn)行培養(yǎng)。

　?。?）檢測(cè)抗體，擴(kuò)大培養(yǎng)，必要是地再克隆化。