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產(chǎn)品名稱 :
Biozol RNA 提取試劑
品牌 :
BIOMIGA
貨號 :
R1020-01
規(guī)格 :
100 mL/100 mL×5
詳細信息 :
產(chǎn)品簡介
Biozol 可從各種真核培養(yǎng)細胞，動物組織，細菌植物和真菌中快速提取總RNA，整個實驗可控制在30分鐘內(nèi)。通常情況下可單次處理1 x 106個真核細胞，1 x 109 個細菌細胞，100 mg 動物或植物組織。如果你要進行全血RNA提取的話，可以使用本試劑盒，不過我們建議使用EzgeneTM Blood RNA Kit （product # R6411）這個專門設(shè)計來用于全血RNA提取的試劑盒，EzgeneTM Blood RNA Kit可以很好的溶血，并去除血紅素，提高RNA的得率。
本試劑盒純化的RNA可用于RT-PCR, Northern 雜交，mRNA純化，體外翻譯等下游實驗。
原理
細胞或組織經(jīng)Biozol裂解，試劑中的成分會抑制RNase活性。加入氯仿抽提，裂解液將分為水相和有機相。RNA存在于水相中，用異丙醇處理水相后,經(jīng)過75%酒精的洗滌，室溫晾干或真空干燥后用DEPC水洗脫就能得到高質(zhì)量的RNA。
貯存條件及其穩(wěn)定性
Biozol 試劑保存于4℃。該產(chǎn)品可保證在購買之日起至少24 個月內(nèi)有效。
產(chǎn)品組分
| Catalog # | R1020-00 | R1020-01 | R1020-02 |
| Biozol 溶液 | 10mL | 100 mL | 100 mL x 5 |
| 說明書 | 1 | 1 | 1 |
注：Biozol 溶液包含異硫氰酸胍和苯酚，實驗時請格外小心。
即日起為方便客戶使用，Biozol溶液改為紅色。
RNA提取操作步驟
真核細胞和組織RNA提取步驟
1. 用1 mL Biozol 試劑 裂解細胞或組織
1 mL Biozol溶液可以充分裂解107個細胞，或是100mg剪碎的組織（30 mm3）
對于單層培養(yǎng)細胞（成纖維細胞，內(nèi)皮細胞等）
按下面的方法在培養(yǎng)瓶中直接裂解細胞：盡量吸干培養(yǎng)基，然后直接將Biozol 溶液加入到培養(yǎng)皿。用裂解液吸打培養(yǎng)皿上面的細胞，使全部細胞都裂解。轉(zhuǎn)移裂解液到1.5mL的離心管。（這個辦法比用胰酶消化收集細胞好一些，因為這樣可以zui大限度降低RNA酶對RNA的降解。）
對于懸浮培養(yǎng)細胞
用不超過1,500 rpm （400 x g） 離心 5分鐘.棄上清，加入Biozol溶液，漩渦混勻或槍頭吸打混勻。然后轉(zhuǎn)移到1.5mL離心管。
對于組織樣品
按照樣品的類型，選擇一個較好的勻漿方法。除了液氮研磨以外，其他勻漿方法可直接在Biozol溶液 中操作。其中對于特殊組織樣品如：肝、脾、骨及軟骨等需要將Biozol用量加大一倍或是降低樣品量。
2. 在室溫下，靜置兩分鐘。
3. 每1 mL Biozol 溶液加入0.2倍體積的氯仿（1 mL Biozol Reagent 對應加入0.2 mL 氯仿），蓋好蓋，用手劇烈震蕩15秒。
4. 4oC 下12,000 xg 離心 3 分鐘。溶液分為酚氯仿相、中間相和上層水相。RNA溶解在水相中。
5. 轉(zhuǎn)移不超過80%的水相到一個干凈的離心管，然后加入0.5倍體積的異丙醇（96-100%,室溫），漩渦充分震蕩15秒。
6. 4oC 下12,000 x g 離心 10 分鐘，離心后試管底部將出現(xiàn)沉淀。
7. RNA沉淀的清洗：沿管壁輕輕加入1mL 75%的乙醇（防止加入乙醇時沖散沉淀），用手輕輕震蕩離心管洗滌沉淀。7500×g離心5分鐘，棄上清，盡量去除殘留乙醇，這樣可以減少鹽離子污染。
8. 重復第7步。
9. RNA的溶解：室溫晾干或真空干燥，（不要過于干燥，否則RNA很難溶解）然后加入30-50 µL DEPC 水溶解RNA，待沉淀*溶解后于-80℃保存。
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