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（一）抗原抗體反應(yīng)
根據(jù)RIA原理，將未標(biāo)記抗原（標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣品）、標(biāo)記抗原和特異性抗體加入反應(yīng)試管中，在一定條件（溫度、時(shí)間及介質(zhì)pH）下進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)抑制反應(yīng)；為取得*實(shí)驗(yàn)效果（如靈敏度及檢測(cè)濃度范圍），上述三種主要試劑可同時(shí)反應(yīng)（平衡法），也可采用非平衡法，先加待測(cè)樣品（或標(biāo)準(zhǔn)品）和抗血清，使非標(biāo)記抗原與抗體達(dá)到結(jié)合平衡，然后再加入標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)與抗體結(jié)合。此外，反應(yīng)溫度和時(shí)間可依據(jù)具體待檢抗原的特性和所用抗體親和力（K值）大小等條件進(jìn)行選擇。若抗原性質(zhì)穩(wěn)定且含量高，反應(yīng)時(shí)間可較短（數(shù)小時(shí)），反應(yīng)溫度可選室溫或37℃；若抗原的理化性質(zhì)不穩(wěn)定（如某些小分子肽）或含量甚微、或抗體的K值較低，則應(yīng)選低溫（4℃）長(zhǎng)時(shí)間（20～24h）反應(yīng)條件。
劑量-反應(yīng)（競(jìng)爭(zhēng)—抑制）曲線圖
（二）分離結(jié)合與游離標(biāo)記物
RIA反應(yīng)平衡后，標(biāo)記抗原與試劑抗體形成免疫復(fù)合物（B）。由于其含量極少，不能自行沉淀，因此需加入適當(dāng)?shù)某恋韯┎拍軐⑵?沉淀，然后經(jīng)離心使其與游離的標(biāo)記抗原（F）分離。某些小分子抗原，也可采用吸附法分離B與F。
B、F分離步驟所造成的誤差是RIA實(shí)驗(yàn)誤差的重要組成部分，可影響方法的靈敏度和測(cè)定的準(zhǔn)確性。理想的分離方法應(yīng)分離*，迅速；分離試劑和過程不影響反應(yīng)平衡，而且效果不受反應(yīng)介質(zhì)因素的影響；操作應(yīng)簡(jiǎn)單、重復(fù)性好以及經(jīng)濟(jì)。
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