清肝注射液具有清熱利濕、利膽退黃之功效［1］，在臨床上已得到廣泛應用，其揮發(fā)性成分主要來自茵陳藥材。茵陳（Herba Artemisiae Scopariae）為傳統(tǒng)中藥［2］，臨床上被廣泛用于治療黃疸、肝炎等疾病，其揮發(fā)油具有廣譜抗菌和殺菌作用［3］。在中藥制劑的質量控制中，注射液中有效成分的來源，即其與對應藥材的相關性十分重要。中藥及其注射液的成分非常復雜，即使用正交投影法（OPA）［4］，子窗口因子分析法（SFA）［5］，直觀推導式演進特征投影法（HELP）［6，7］等二維數(shù)據(jù)分辨方法進行解析后與標準譜庫進行匹配，也不能將所有物質定性。在組分不*清楚的情況下，本實驗充分利用聯(lián)用色譜的色譜、質譜信息，結合光譜相關色譜法［8］，對相同條件下所得的清肝注射液和茵陳藥材揮發(fā)性成分的數(shù)據(jù)進行了詳細的對比。報道如下。

　　1  儀器與試藥

　　GC-8100型氣相色譜儀（滕州市經(jīng)緯分析儀器有限責任公司）；揮發(fā)油提取器。

　　清肝注射液（批號：040607）和茵陳藥材均由江西省天施康中藥股份有限公司提供；正己烷為分析純，水為蒸餾水。

　　2  方法

　　2.1  方法原理相同條件下所得的兩個色譜曲線，雖然同*出組分的保留時間可能存在漂移，但其光譜（或質譜）應該相同或相似。因此，通過對不同流出時間點的光譜（或質譜）進行相關計算，可得一個類似色譜的光譜相關系數(shù)曲線，稱之為光譜相關色譜［8］。

　　一般說來，兩個組分的光譜相關系數(shù)可由下式計算：

　　r（i,j）=（si-i）T（sj-j）ll（sj-j）ll（sj-j）ll          （1）

　　式中- 1 ≤  ≤1 ， r越大表示組分i的光譜（或質譜）si 與組分j 的光譜（或質譜）Sj 越相似。當r = 1 且保留時間相近時，色譜曲線中的兩個組分應為同一化學物質。實際上，由于噪聲和量測誤差等因素的存在， r zui大值不可能等于1，只能接近于1。‖·‖表示Frobenius 范數(shù)， T為向量的轉置，變量上的一橫表示相應變量的均值。

　　設某一樣本化學色譜指紋圖譜的某一組分純物質質譜為s,另一樣本色譜指紋圖譜所包含的所有質譜,即每一保留時間點所對應的質譜，記為xj （ j = 1 , . . . , m , m 為zui大色譜保留時間點） ，計算s與xj 的相關系數(shù)即可得相對于該純物質的光譜相關色譜，根據(jù)式（1） 計算如下：

　　r（s,xj）=（s-）T（xj-j）ll（s-）ll ll（xj-j）ll        （2）

　　將r （ s , Xj） 對色譜保留時間作圖即得到該目標物質與這一樣本色譜指紋圖譜的光譜相關色譜曲線。如果色譜流出時間方向上所對應的一段光譜相關色譜曲線的值很接近1，則說明目標物質存在于該樣本，再結合色譜保留時間信息即可實現(xiàn)相同條件下樣本的相關性分析。

　　2.2   供試品溶液的制備量取注射液50 ml（或稱取藥材12.5 g），置于圓底燒瓶中，加玻璃珠數(shù)粒，連接揮發(fā)油提取器。揮發(fā)油提取器的收集管中上端加水，使充滿刻度部分，再加正己烷1 ml，連接回流冷凝管，適當溫控提取。從回流開始計時，控制溫度使每分鐘約20滴。60 min后停止加熱，冷卻，收集含有揮發(fā)油組分的正己烷溶液。用正己烷定容至2 ml，即得。所用藥材的量與注射液的濃度一致。

　　2.3   色譜條件

　　2.3.1  GC條件OV-1彈性石英毛細管柱30 m×0.25 mm×0.25 μm，進樣口溫度250℃，載氣為N2，流速0.70 ml·min-1，分流比5∶1，程序升溫起始溫度為60℃ （保持5 min），然后以4℃·min-1的速度升溫至240 ℃（保持5 min），進樣量1μl。

　　2.3.2  MS條件電離方式為EI源；電子能量0.75 kv；離子源溫度200℃；質量范圍（m/z）30～400 amu；掃描間隔0.2 s/scan。

　　3  結果

　　3.1  茵陳藥材與注射液中揮發(fā)性成分定性、定量分析采用GC/MS聯(lián)用技術，對茵陳藥材和清肝注射液中的揮發(fā)性成分進行分析，分別分離出28個和23個主要成分。將所得各成分的質譜圖，直接用該機的數(shù)據(jù)系統(tǒng)進行檢索（譜庫NIST107），并用標準圖譜比較，確定其成分。用島津公司GC/MS工作站中的峰面積歸一化法，測定各成分的相對百分含量。定性、定量結果見表1。表1  清肝注射液和茵陳藥材中揮發(fā)性成分定性、定量結果%表1中第1列左邊數(shù)字表示在茵陳中的峰號，右邊數(shù)字表示在清肝注射液中的峰號；“-”表示未被檢出

　　3.2  茵陳藥材與清肝注射液中揮發(fā)性成分的相關性分析

　　a茵陳藥材中揮發(fā)性成分的TLC  b清肝注射液中揮發(fā)性成分的TLC

　　圖1為茵陳藥材和清肝注射液中揮發(fā)性成分的總離子流圖（TLC），它們均是很復雜的分析體系, 大部分色譜峰都達到基線分離，但也有些色譜峰出現(xiàn)重疊現(xiàn)象。對于已得到定性結果的譜峰，根據(jù)二者的色譜保留時間以及定性分析結果可以確定其相關關系及歸屬問題。對于匹配率較低的譜峰，如清肝注射液中的15號、17號和18號峰，采用光譜相關色譜的方法來確定它們的對應關系。

　　在相關色譜分析前，首先要得到各譜峰的純質譜。17號和18號峰均為純峰，各色譜流出點對應的質譜圖均相同。因此，任取其中的一點對應的質譜即可得到其純質譜。由于15號峰不純，首先要確定純物質區(qū)域，這可以通過二維數(shù)據(jù)解析［6，7］獲得。其純物質區(qū)域各點對應的質譜為純質譜。在實際計算中，為了避免噪聲和計算誤差的影響，我們一般選取色譜響應值zui高的點附近的一段區(qū)域，進行重復計算得到光譜相關色譜。

　　如清肝注射液中18號峰與藥材中對應譜峰的確定。清肝注射液中18號峰的純質譜，記為S1。根據(jù)公式（2）對茵陳藥材數(shù)據(jù)中保留時間為35.5～40 min的部分作相關色譜分析，可得注射液中18號峰與茵陳藥材圖譜的光譜相關色譜（見圖2）。在光譜相關色譜中，35.5～40 min的相關系數(shù)值zui大為0. 998 8，很接近1 ，其對應的色譜流出時間與茵陳藥材的24號峰的一致，這說明清肝注射液中的組分18與茵陳藥材圖譜中組分24的質譜十分相似,應為同一物質（見圖3～4）。用相同方法對清肝注射液中的15號和17號峰與茵陳藥材圖譜中組分的對應關系進行分析，確定其分別與茵陳藥材譜圖中的21號和23號譜峰相對應。

　　清肝注射液中的23個主要成分中除4號和21號峰外，其余均來源于茵陳藥材。4號峰和21號峰對應的物質可能來源于助溶劑吐溫-80，但進一步的確認還需要實驗的證明。茵陳藥材中揮發(fā)性成分的zui高響應值約為清肝注射液中物質zui高響應值的7倍。可見，廠家*可以改進工藝提高藥材中揮發(fā)性成分的提取率。