金壇市精達(dá)儀器制造廠.---高通量測(cè)序技術(shù)是對(duì)傳統(tǒng)測(cè)序一次革命性的改變, 一次對(duì)幾十萬(wàn)到幾百萬(wàn)條DNA分子進(jìn)行序列測(cè)定, 因此在有些文獻(xiàn)中稱其為下一代測(cè)序技術(shù)（next generation sequencing）足見(jiàn)其劃時(shí)代的改變, 同時(shí)高通量測(cè)序使得對(duì)一個(gè)物種的轉(zhuǎn)錄組和基因組進(jìn)行細(xì)致全貌的分析成為可能, 所以又被稱為深度測(cè)序（deep sequencing）. 高通量測(cè)序平臺(tái)的代表是羅氏公司（Roche）的454測(cè)序儀（Roch GS FLX sequencer）, Illumina公司的Solexa基因組分析儀（Illumina Genome Analyzer）和ABI的SOLiD測(cè)序儀（ABI SOLiD se-quencer）. 2008年4月Helico BioScience公司的Timothy等人在Science上報(bào)道了他們開(kāi)發(fā)的真正的單分子測(cè)序技術(shù), 并利用該技術(shù)對(duì)一個(gè)M13病毒基因組進(jìn)行重測(cè)序. 這項(xiàng)技術(shù)之所以被稱為真正的單分子測(cè)序, 是因?yàn)樗?跨過(guò)了上述3種高通量測(cè)序依賴的基于PCR擴(kuò)增的信號(hào)放大過(guò)程, 真正達(dá)到了讀取單個(gè)熒光分子的能力, 向1000美元測(cè)定一個(gè)人類基因組的目標(biāo)邁出了一大步.

這些平臺(tái)共同的特點(diǎn)是*的測(cè)序通量, 相對(duì)于傳統(tǒng)測(cè)序的96道毛細(xì)管測(cè)序, 高通量測(cè)序一次實(shí)驗(yàn)可以讀取40萬(wàn)到400萬(wàn)條序列. 讀取長(zhǎng)度根據(jù)平臺(tái)不同從25堿基到450堿基, 不同的測(cè)序平臺(tái)在一次實(shí)驗(yàn)中, 可以讀取1G到14G不等的堿基數(shù), 這樣龐大的測(cè)序能力是傳統(tǒng)測(cè)序儀所不能比擬的.

高通量測(cè)序的應(yīng)用

高通量測(cè)序可以幫助研究者跨過(guò)文庫(kù)構(gòu)建這一實(shí)驗(yàn)步驟, 避免了亞克隆過(guò)程中引入的偏差. 依靠后期強(qiáng)大的生物信息學(xué)分析能力, 對(duì)照一個(gè)參比基因組（reference genome）高通量測(cè)序技術(shù)可以非常輕松完成基因組重測(cè)序（re-sequence）, 2007年van Or-souw等人[56]結(jié)合改進(jìn)的AFLP技術(shù)和454測(cè)序技術(shù)對(duì)玉米基因組進(jìn)行了重測(cè)序, 該重測(cè)序?qū)嶒?yàn)發(fā)現(xiàn)的超過(guò)75%的SNP位點(diǎn)能夠用 SNPWave 技術(shù)驗(yàn)證, 提供了一條對(duì)復(fù)雜基因組特別是含有高度重復(fù)序列的植物基因組進(jìn)行多態(tài)性分析的技術(shù)路線. 2008年Hillier對(duì)線蟲(chóng)CB4858品系進(jìn)行Solexa重測(cè)序, 尋找線蟲(chóng)基因組中的SNP位點(diǎn)和單位點(diǎn)的缺失或擴(kuò)增. 但是也應(yīng)該看到, 由于高通量測(cè)序讀取長(zhǎng)度的限制, 使其在對(duì)未知基因組進(jìn)行從頭測(cè)序（de novo sequencing）的應(yīng)用受到限制, 這部分工作仍然需要傳統(tǒng)測(cè)序（讀取長(zhǎng)度達(dá)到850堿基）的協(xié)助. 但是這并不影響高通量測(cè)序技術(shù)在全基因組mRNA表達(dá)譜, microRNA表達(dá)譜, ChIP-chip以及DNA甲基化等方面的應(yīng)用.www.jingda17.net