国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學(xué)|元素分析|水分測定儀|樣品前處理|試驗機|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>工作原理>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線咨詢

【感受態(tài)細(xì)胞的制備】 一步法制備感受態(tài)細(xì)胞

來源:上海北諾生物科技有限公司   2013年05月15日 20:30  

一、操作步驟:

1. 涂平板:為取得*的感受態(tài)效率,必須先把甘油菌或其它形式保存的菌種涂LB平板,并培養(yǎng)過夜。

2. 接種:取一有新鮮培養(yǎng)的菌種的LB平板,后續(xù)操作均在超凈臺內(nèi)進行。把鑷子的頂端在70%酒精中蘸一下,并在酒精燈上略略燒一下,使鑷子的頂端處于無菌狀態(tài)。用鑷子夾取一個無菌的塑料槍頭或牙簽,從平板上挑取一個單克隆,然后把蘸有菌種的塑料槍頭或牙簽放到裝有3毫升LB的細(xì)菌培養(yǎng)試管內(nèi)。上述操作也可以使用接種環(huán)等進行操作。

3. 培養(yǎng):37℃約200rpm培養(yǎng)過夜,通常培養(yǎng)時間控制在16小時左右為宜。不宜超過18小時。

4. 再接種培養(yǎng):根據(jù)需要制備的感受態(tài)細(xì)菌的量,按照1:100的比例用新鮮培養(yǎng)的過夜菌接種培養(yǎng)。例如取500微升的新鮮過夜菌到50毫升的LB中繼續(xù)37℃約200rpm培養(yǎng)。通常在大約培養(yǎng)2-2.5小時后OD600可以達到0.3-0.5。

5. 制備感受態(tài)細(xì)菌:在培養(yǎng)的細(xì)菌OD600達到0.3-0.5時,4℃2000g離心5分鐘收集細(xì)菌。如果離心沉淀前的菌量為50毫升,按后續(xù)操作進行,如果是其它體積則按比例換算后進行后續(xù)操作。用5毫升預(yù)冷的LB重新懸浮起細(xì)菌沉淀,加入5毫升在冰浴或冰水浴上融解的感受態(tài)制備試劑,混勻,冰浴放置5分鐘。然后再輕輕混勻,根據(jù)實驗需要適當(dāng)分裝到1.5毫升或0.5毫升的離心管內(nèi)后-70℃保存。

注:如果以后會只做單管的轉(zhuǎn)化,可以分裝成每管zui少50微升或100微升,如果以后一次性做多個轉(zhuǎn)化,可以每管分裝500微升或更大體積。-70℃保存后,感受態(tài)的效率會隨時間的推移逐漸下降,但通常在半年內(nèi)使用轉(zhuǎn)化效率下降不會太多??偟膩碚f,新鮮制備的感受態(tài)要比凍存的感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率更高一些。

二、注意事項:

1. 需自行配制LB液體培養(yǎng)基和LB平板以用于細(xì)菌的培養(yǎng)和感受態(tài)效率的檢測。

2. 盡管凡是處于對數(shù)期內(nèi)的細(xì)菌都可以用于感受態(tài)細(xì)菌的制備,但如果細(xì)菌生長的OD600的值達到0.3-0.5左右時,制備出來的感受態(tài)效果*。

3. 在制備感受態(tài)細(xì)菌的過程中均使用不含抗生素的LB。在使用感受態(tài)菌的過程中熱休克后的37℃培養(yǎng)時也必須使用無抗生素的LB,即便轉(zhuǎn)入的質(zhì)粒是有抗性的。

4. 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

免責(zé)聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
  • 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
企業(yè)未開通此功能
詳詢客服 : 0571-87858618
乌兰浩特市| 观塘区| 特克斯县| 中阳县| 江北区| 正阳县| 江陵县| 赣榆县| 武清区| 新乡市| 新营市| 辽宁省| 民丰县| 绍兴市| 北海市| 丰宁| 彭水| 滨海县| 嘉祥县| 平原县| 丹寨县| 湄潭县| 甘洛县| 两当县| 云龙县| 都匀市| 深圳市| 翁源县| 石门县| 桦南县| 宜兰市| 攀枝花市| 沅江市| 集安市| 迭部县| 平舆县| 西安市| 全南县| 油尖旺区| 抚顺市| 日照市|