上海北諾生物科技有限公司

進(jìn)入展臺在線留言

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您？在線咨詢

微生物水體中大腸菌群的檢測

來源：上海北諾生物科技有限公司 2013年05月26日 13:21

實(shí)驗(yàn)原理

所謂大腸菌群，是指在37℃培養(yǎng)24h 內(nèi)能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣的兼性厭氧的革藍(lán)氏陰性無芽孢桿菌的總稱。主要由腸桿菌科中四個(gè)屬內(nèi)的細(xì)菌組成，即埃希氏桿菌屬、檸檬酸桿菌屬、克雷伯氏菌屬和腸桿菌屬。

水的大腸菌群數(shù)是指100 mL水檢樣內(nèi)含有的大腸菌群實(shí)際數(shù)值，以大腸菌群zui近似數(shù)（MPN）表示。在正常情況下，腸道中主要有大腸菌群、糞鏈球菌和厭氧芽孢桿菌等多種細(xì)菌。這些細(xì)菌都可以隨人畜排泄物進(jìn)入水源，由于大腸菌群在腸道內(nèi)數(shù)量多，所以，水源中大腸菌群的數(shù)量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一項(xiàng)重要指標(biāo)。目前，上已*大腸菌群是糞便污染的指標(biāo)。因而對飲用水必須進(jìn)行大腸菌群的檢查。

水中大腸菌群的檢測方法，常用多管發(fā)酵法和濾膜法。多管發(fā)酵法可適用于各種水樣的檢驗(yàn)，但操作繁瑣，需要的時(shí)間較長。濾膜法僅適用于自來水和深井水，操作簡單、快速，但不適用于雜質(zhì)較多、易于堵塞濾孔的水樣。

材料與器皿

（—）培養(yǎng)基

1、普通乳糖蛋白胨培養(yǎng)液

蛋白胨 10g，牛肉膏 3g，乳糖5g，氯化鈉 5g，1.6％溴甲酚紫乙醇液 1.0mL，蒸餾水 1000mL，pH 7.2~7.4。

將蛋白胨、牛肉膏、乳糖、氯化鈉加熱溶解于1000mL蒸餾水中，調(diào)節(jié)pH為7.2~7.4，再加入1.6％溴甲酚紫乙醇液1.0mL，充分混勻，分裝于有杜漢氏小管的試管中，每管10mL，115℃滅菌20min。

2、三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液

按上述普通乳糖蛋白胨培養(yǎng)液濃縮三倍配制，分裝于有杜漢氏小管的試管中，每管5mL。

1、品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基（供平板分離用）

蛋白胨 10g，乳糖 10g，K2HPO4 3.5g，瓊脂 15～20g，蒸餾水1000mL，無水亞硫酸鈉 5g，5％的堿性品紅乙醇溶液 20mL，pH 7.2~7.4。

4、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基（EMB培養(yǎng)基）（供發(fā)酵法平板分離用，3和4可任選一種）

蛋白胨10g，乳糖10g，K2HPO4 2.0g，瓊脂20g，蒸餾水1000mL，2％伊紅（曙紅）水溶液 20mL，5％美藍(lán)（亞甲藍(lán)）水溶液13mL，pH 7.2~7.4。

（二）滅菌移液管、滅菌稀釋水、試管、杜漢氏小管、革蘭氏染色液、滅菌培養(yǎng)皿。

實(shí)驗(yàn)過程

（一）水樣的采集

供細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的水樣，必須按一般無菌操作的基本要求采集，并保證再運(yùn)送、貯存過程中不受污染。水樣從采集到檢驗(yàn)不應(yīng)超過4h ，在0～4℃下保存不應(yīng)超過24h ，如不能在4h 內(nèi)分析，應(yīng)在檢驗(yàn)報(bào)告上注明保存時(shí)間和條件。

1、自來水取樣：應(yīng)在水打開放水5min ，再用無菌容器接取水樣，待分析。如水樣內(nèi)含有余氯，則采樣瓶滅菌后按每500mL水樣加3％Na2S2O3.5H2O溶液1mL。

2、江、河、湖、池自然水體取樣：可用采樣器，采樣瓶應(yīng)先滅菌。采樣后，瓶內(nèi)應(yīng)留有空隙。如果與其他化驗(yàn)項(xiàng)目聯(lián)合取樣，細(xì)菌學(xué)分析水樣應(yīng)采在其他樣品之前。

（二）初發(fā)酵試驗(yàn)

1、水樣稀釋：制備水樣10^-1、10^-2的稀釋液，方法為用無菌移液管吸取水樣10mL放于盛有90mL無菌水和若干玻璃珠的錐形瓶中，充分振蕩使混合均勻，并使其中的細(xì)菌盡量呈單個(gè)存在，即為10^-1稀釋液；再從10^-1制備10^-2稀釋液。以此類推，稀釋到所需倍數(shù)。

2、接種和培養(yǎng)：以無菌操作于5支三倍濃縮培養(yǎng)基（接種前一定應(yīng)先檢查杜漢氏小管內(nèi)有無氣泡）中各加入水樣10mL，5支普通培養(yǎng)基試管中加入水樣1mL，5支普通培養(yǎng)基試管中加入10^-1稀釋液1mL，小心混勻放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h 。此即5管法。

3、結(jié)果觀察：37℃中培養(yǎng)24h后取出觀察，觀察有無氣體（杜漢氏小管內(nèi)有無氣體）和酸產(chǎn)生（培養(yǎng)基有無變色）。在48h之間，培養(yǎng)管內(nèi)倒置的杜漢氏小管內(nèi)有任何量的氣體積累，或培養(yǎng)基顏色從紫色變?yōu)辄S色，便可初步斷定為陽性反應(yīng)。

若實(shí)驗(yàn)所測定的15支管中均為陽性反應(yīng)，說明濃水樣污染嚴(yán)重，可將樣品進(jìn)一步稀釋后，再按上述方法接種、培養(yǎng)和觀察。

（三）平板培養(yǎng)試驗(yàn)

將初發(fā)酵實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)酸產(chǎn)氣的后只產(chǎn)酸或只產(chǎn)氣的試管中的培養(yǎng)物用接種環(huán)取少許，劃線接種在品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基或伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基平板上，為了確保獲得分離的單菌落，須注意以下事項(xiàng)：

（1）劃線間距至少相隔0.5厘米；

（2）接種釘要稍彎；

（3）先對試管輕擊并使之傾斜，以免接種針挑取到任何膜狀物或浮渣；

（4）劃線時(shí)要用針尖的彎曲部分接觸瓊脂培養(yǎng)基平面．以免刮傷或戳破培養(yǎng)基。劃線后培養(yǎng)皿倒置，于37℃培養(yǎng)18～24h。

24h后，觀察在平板上出現(xiàn)的單個(gè)菌落，其核心有深綠色金屬光澤者為較典型的大腸菌群菌落。盡可能挑取典型的或接近典型的大腸菌群菌落，在營養(yǎng)瓊脂斜面上劃線，置37℃培養(yǎng)24h。挑取斜面培養(yǎng)物制成涂片，進(jìn)行革蘭氏染色，凡屬革蘭氏陰性桿菌，即確認(rèn)了大腸菌群細(xì)菌的存在．

（四）復(fù)發(fā)酵驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

經(jīng)上述經(jīng)染色為革蘭氏陰性的典型菌落，用接種環(huán)刮取部分接種于盛有乳糖培養(yǎng)基的試管中，在37℃培養(yǎng)24h，陽性反應(yīng)者即確認(rèn)為大腸菌群細(xì)菌。

結(jié)果計(jì)算

在初發(fā)酵試驗(yàn)中，可能有極少數(shù)能發(fā)酵乳糖產(chǎn)氣的非大腸菌群細(xì)菌混在陽性可疑反應(yīng)管中，通過對初發(fā)酵中的陽性可疑管進(jìn)行平板和復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)，并進(jìn)行革蘭氏染色和細(xì)菌形態(tài)的觀察，可將那些少量的非大腸菌群細(xì)菌（“假陽性管”）刪除去，故在記錄時(shí)只能把三步試驗(yàn)都呈陽性的試管計(jì)入陽性反應(yīng)管。

如果初發(fā)酵接種水樣量為10mL、1mL、0.1mL，可直接查表求出原水樣100mL中大腸菌群指數(shù)（MPN）。如果接種水樣量低于上述水樣量，則經(jīng)下面的換算式計(jì)算。

目前我國系以1L水樣中的菌數(shù)為報(bào)告值，即為MPN×10。

水樣的總大腸菌群檢索表

出現(xiàn)陽性反應(yīng)的試管數(shù)			每100ml中的細(xì)菌的MPN	出現(xiàn)陽性反應(yīng)的試管數(shù)			每100ml中的細(xì)菌的MPN
10ml管	1ml管	0.1ml管	每100ml中的細(xì)菌的MPN	10ml管	1ml管	0.1ml管	每100ml中的細(xì)菌的MPN
0 0 0 0	0 0 0 0	0 1 2 3	0 2 4 5	0 0 0 0	2 2 2 2	0 1 2 3	4 6 7 9
0 0 0 0	1 1 1 1	0 1 2 3	2 4 6 7	0 0 0 0	3 3 3 3	0 1 2 3	6 7 9 11
0 0 0 0	4 4 4 4	0 1 2 3	8 9 11 13	1 1 1 1	3 3 3 3	0 1 2 3	8 10 12 13

相關(guān)產(chǎn)品

免責(zé)聲明

凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題，請?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。

国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

微生物水體中大腸菌群的檢測

免責(zé)聲明

聯(lián)系我們

關(guān)注我們

国产精品视频一区二区三区四,亚洲av美洲av综合av,99国内精品久久久久久久,欧美电影一区二区三区电影

微生物 水體中大腸菌群的檢測

免責(zé)聲明

聯(lián)系我們

關(guān)注我們

微生物水體中大腸菌群的檢測