辛基-瓊脂糖凝膠 4FF是將辛基鍵合在瓊脂糖凝膠4FF上形成的一種可利用疏水相互作用來實現(xiàn)目標產(chǎn)品純化分離的疏水類介質(zhì)。用于生物大分子和乙肝疫苗的純化分離。

1 外觀

本品為白色球狀凝膠,無嗅、無味、無肉眼可見雜質(zhì)。

2.理化指標

      *柱子：內(nèi)徑50mm、柱長30cm。柱床高15cm,25℃, 流動相為0.1mol/LNaCl。

3 包裝

產(chǎn)品以無菌試劑瓶密封包裝，外貼標簽，注明“品名、體積、顆粒大小、應用、生產(chǎn)單位”等內(nèi)容。所選用的包裝應有利于保證產(chǎn)品質(zhì)量、方便運輸和貯存。

4 運輸

運輸中應避免日曬、雨淋、重壓，嚴禁與有毒、有害物品混運。

5 貯存

產(chǎn)品應密封貯存在4℃~30℃（保存溶液為20% 乙醇+0.1M醋酸鈉），通風、干燥、清潔的地方。不能冷凍。

用過的柱子貯存在4℃（20% 乙醇）。

6 保質(zhì)期：

3年。

7 應用

辛基-瓊脂糖凝膠 4FF是一種疏水層析介質(zhì)，利用樣品中組分疏水性的不同進行分離。用于生物大分子的純化分離。

下面簡要介紹介質(zhì)的使用過程。

7.1 裝柱

（1）讓所有的材料和試劑達到室溫。配制初始緩沖液（平衡液）和洗脫緩沖液。

（2）根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始緩沖液（按凝膠：緩沖液=3：1的比例）配成勻漿。

（3）將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位（液面略高于濾膜），務必使底端無氣泡。

（4）用玻璃棒引導勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi)，注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口，使凝膠在柱內(nèi)自由沉降，連結(jié)好柱子頂端柱頭。

（5）打開蠕動泵，讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過，使柱床穩(wěn)定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。

7.2 平衡

讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子，到流出液電導和pH不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L（NH4）2SO4等。

7.3 上樣

（1）樣品用平衡液配制，渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。

（2）一般情況是讓目標產(chǎn)品結(jié)合在柱子上，用平衡液洗去雜質(zhì)，再選擇一種洗脫液洗下目標產(chǎn)品。

（3）介質(zhì)對樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質(zhì)、流動相的離子強度和溫度。鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強，介質(zhì)對組分吸附牢。

7.4 洗脫

疏水介質(zhì)可用減小鹽濃度進行洗脫。加表面活性劑或有機溶劑可加強洗脫。常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液，如0.02~0.05mol/L的PBS。

7.5 再生

一般用低鹽濃度的緩沖液洗，洗10倍以上柱體積，接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。

若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。

7.6 在位清洗

（1）對于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白，可以用2M Nacl去除。

（2）對沉淀蛋白、對以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類，可用1M NaOH 去除。

（3）對強疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等，用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗，但要注意有機溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加，否則容易產(chǎn)生氣泡。

清洗完畢后，用至少3倍緩沖液平衡柱子。

7.7注意

在裝柱、使用和保存柱子的時候，要避免柱子流干，氣泡進入。

7.8 去熱源

用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時或用0.1M的氫氧化鈉24小時。或用以下方法步驟去除：

（1）2倍柱體積的70%乙醇；

（2）2倍柱體積50mM Tris-Hcl pH7.5；

（3）1倍柱體積4M尿素；

（4）3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M Nacl；

以上緩沖液都在無熱源的雙蒸水中配制。

7.9 消毒

用0.5~1M NaOH室溫下洗8~10倍柱體積，初始緩沖液平衡柱子。