1. 試驗準備:200ul/1mlTip頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌),酒精棉球,廢液缸,試管架,微量移液器,記號筆,培養(yǎng)皿,離心管。
2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基,用1ml的PBS溶液洗滌兩次。
3. 用Tip頭加入1ml Trypsin液,消化1分鐘(37℃,5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁,觀察到細胞*從壁上脫落下來為止。
6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中,1000rpm離心5min。
7. 用培養(yǎng)液重懸細胞,細胞計數(shù)后選擇0.8X106個細胞加入一個35mm培養(yǎng)皿。
8. 將合適體積*培養(yǎng)液加入離心管中,混勻細胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中,使其均勻分布。
9. 將培養(yǎng)皿轉入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng),第二天轉染。
① 將400ul去核酸酶水加入管中,震蕩10秒鐘,溶解脂狀物。
4. 吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基,用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次。
5. 加入混合液,將細胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時。
6. 到時后,根據(jù)細胞種類決定是否移除混合液,之后加入*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時。
1. 在轉染后24小時,觀察實驗結果并記錄綠色熒光蛋白表達情況。
2. 再次進行細胞傳代,按照免疫染色合適的密度0.8X105個細胞/35mm培養(yǎng)皿將細胞重新轉入培養(yǎng)皿中。
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