蛋白質(zhì)的研究發(fā)展歷程
1.蛋白質(zhì)鑒定:可以利用一維電泳和二維電泳并結(jié)合Western等技術(shù),利用蛋白質(zhì)芯片和抗體芯片及免疫共沉淀等技術(shù)對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定研究。
2.翻譯后修飾:很多mRNA表達(dá)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)要經(jīng)歷翻譯后修飾如磷酸化,糖基化,酶原激活等。翻譯后修飾是蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)功能的重要方式,因此對(duì)蛋白質(zhì)翻譯后修飾的研究對(duì)闡明蛋白質(zhì)的功能具有重要作用。
3.蛋白質(zhì)功能確定:如分析酶活性和確定酶底物,細(xì)胞因子的生物分析/配基-受體結(jié)合分析。可以利用基因敲除和反義技術(shù)分析基因表達(dá)產(chǎn)物-蛋白質(zhì)的功能。另外對(duì)蛋白質(zhì)表達(dá)出來(lái)后在細(xì)胞內(nèi)的定位研究也在一定程度上有助于蛋白質(zhì)功能的了解。Clontech的熒光蛋白表達(dá)系統(tǒng)就是研究蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)定位的一個(gè)很好的工具。
蛋白質(zhì)生物合成
4.對(duì)人類而言,蛋白質(zhì)組學(xué)的研究zui終要服務(wù)于人類的健康,主要指促進(jìn)分子醫(yī)學(xué)的發(fā)展。如尋找藥物的靶分子。很多藥物本身就是蛋白質(zhì),而很多藥物的靶分子也是蛋白質(zhì)。藥物也可以干預(yù)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。
在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和疾病機(jī)理研究中,了解人不同發(fā)育、生長(zhǎng)期和不同生理、病理?xiàng)l件下及不同細(xì)胞類型的基因表達(dá)的特點(diǎn)具有特別重要的意義。這些研究可能找到直接與特定生理或病理狀態(tài)相關(guān)的分子,進(jìn)一步為設(shè)計(jì)作用于特定靶分子的藥物奠定基礎(chǔ)。
蛋白質(zhì)組學(xué)研究的基本技術(shù)
對(duì)于蛋白質(zhì)組學(xué)的研究來(lái)說(shuō),它的zui基本的實(shí)驗(yàn)手段就是利用雙向凝膠電泳(two-dimensional protein electrophoresis, 2DE),在整個(gè) 基因組水平上檢測(cè)蛋白質(zhì)表達(dá)的情況。雙向凝膠電泳首先利用等電點(diǎn)聚焦來(lái)分離不同等電點(diǎn)的蛋白,再利用SDS-PAGE來(lái)分離不同分子量的蛋白,其分辨率是非常高的。微克級(jí)的蛋白質(zhì)就可以被很好的分辨開了,如在微克級(jí)水平上,有人從一個(gè)蛋白混合物中zui多分開了11200種蛋白質(zhì),數(shù)量是非??捎^的。因而,微克級(jí)的蛋白的雙向凝膠電泳常被用來(lái)初步檢測(cè)表達(dá)或修飾有變化的蛋白。然后,同樣的蛋白混合物樣品可用于毫克級(jí)的2DE,這樣,電泳圖譜上的每一個(gè)多肽就可被純化并進(jìn)行下一步的分析,如質(zhì)譜,末端或中間的氨基酸序列分析等。
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