酶組織化學(xué)顯示的常見(jiàn)三種方法介紹

 酶作為一種催化劑，已被廣泛地應(yīng)用于輕工業(yè)的各個(gè)生產(chǎn)領(lǐng)域。近幾十年來(lái)，隨著酶工程的迅猛發(fā)展，酶在生物工程、生物傳感器、環(huán)保、醫(yī)藥等方面的應(yīng)用也日益擴(kuò)大，可以說(shuō)酶已成為國(guó)民經(jīng)濟(jì)中*的一部分，現(xiàn)實(shí)生活中，人們的衣、食、住、行及其他方面的新技術(shù)幾乎都離不開(kāi)酶。
而酶類(lèi)的顯示方法常見(jiàn)的也有好多種，現(xiàn)在就有上海滬鼎生物以常見(jiàn)的三種一一為你列舉分析吧！

   *種．偶聯(lián)偶氮色素法  此法又稱(chēng)偶氮色素法（couplingazo dyemethod），是指用某種人工合成底物在酶作用下產(chǎn)生分解產(chǎn)物，分解產(chǎn)物與重氮鹽結(jié)合，引起偶聯(lián)偶氮反應(yīng)，形成不溶性偶氮色素，以此對(duì)酶定位。常用的底物是萘酚系列化合物，如l—萘酚、2—萘酚、6—溴—2—萘酚、萘酚AS、萘酚AS衍生物等。由于重氮鹽的種類(lèi)不同，偶氮色素的顏色也不同，可顯示出紫色、藍(lán)色、紅色、褐色、棕色和黑色等各種顏色。
    重氮鹽有不同程度的抑制酶活性作用，因此必須選擇抑制作用zui弱的種類(lèi)使用。根據(jù)重氮鹽抑制作用的有無(wú)和強(qiáng)弱，可將偶氮色素法分為兩種：
    （1）同時(shí)偶聯(lián)法：是在底物混合液中，通過(guò)酶分解作用所得到的沉著物立即與重氮鹽偶聯(lián)形成偶氮色素。
    （2）后偶聯(lián)法：為防止重氮鹽對(duì)酶的抑制作用，先使酶與底物發(fā)生作用，使分解產(chǎn)物沉著，然后再浸漬于重氮鹽液中，使其形成偶氮色素。
    偶聯(lián)偶氮色素法具有作用時(shí)間較短、不容易發(fā)生酶丟失、正常組織細(xì)胞中無(wú)內(nèi)源性底物和zui終反應(yīng)產(chǎn)物不易褪色等優(yōu)點(diǎn)。但該法所用底物的分解產(chǎn)物有不同程度擴(kuò)散，故定位欠準(zhǔn)確，且人工合成底物價(jià)格較貴。
第二種．金屬—金屬鹽法  一般是指金、銀、銅、鐵、鉛和鈷等金屬，金屬本身或其鹽的化合物都具有顏色，容易發(fā)生呈色反應(yīng)。而且酶的分解產(chǎn)物容易與金屬結(jié)合。因此，捕捉酶反應(yīng)的分解產(chǎn)物，使其與金屬結(jié)合，利用呈色反應(yīng)，再現(xiàn)酶反應(yīng)部位，可以證明某種酶的存在。故稱(chēng)為金屬—金屬鹽法或金屬沉著法（metal precipitation method），此法大致分三種：
    （1）酶作用于底物時(shí)，其分解產(chǎn)物與底物混合液中某種物質(zhì)結(jié)合，·沉著在作用部位，然后結(jié)合物被金屬置換，通過(guò)金屬顯色來(lái)證明酶的存在。把上述反應(yīng)過(guò)程歸納為三個(gè)階段，即酶反應(yīng)階段、金屬置換階段和顯色階段。
    （2）與*種方法相比，省略了金屬置換步驟。酶作用于底物后的分解產(chǎn)物與底物孵育液中的金屬離子相結(jié)合，直接沉著于酶反應(yīng)部位，使其顯色。
  （3）此法特點(diǎn)是使用人工底物（前兩種方法使用天然底物）。在酶的作用下，人工底物的分解產(chǎn)物與特定金屬結(jié)合，立即顯色，或通過(guò)顯色操作使其顯色。此法包括硫代膽堿銅法和羥喹啉鐵法。其優(yōu)點(diǎn)是：底物、捕捉劑價(jià)格便宜；金屬離子容易反應(yīng)，沉著顆粒微細(xì)，反應(yīng)色調(diào)鮮明。缺點(diǎn)是易褪色，組織細(xì)胞中有些成分可吸附金屬離子，產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng)。
    第三種．色素形成法  在酶作用下使無(wú)色化學(xué)物質(zhì)在局部形成色素沉著。以下主要介紹三種類(lèi)型：
    （1）四唑鹽法（tetrazolium method）：此法主要顯示各種脫氫酶。在脫氫酶作用下，組織切片在含有四唑鹽或雙四唑鹽的底物混合液中，使底物分離出的氫原子與五色四唑鹽或雙四唑鹽結(jié)合形成紅色或藍(lán)色甲臘（formazane）或二甲臘（difomazane）色素。這種色素沉著于酶所在部位。

四唑鹽法原理
    （2）靛酚藍(lán)法（indophenol blue method）：該法主要顯示細(xì)胞色素氧化酶和過(guò)氧化物酶，是Na—di反應(yīng)用于檢測(cè)氧化酶的方法。把二甲基—對(duì)—苯二胺和a—萘酚加入底物混合液中，由酶作用而釋放的氧與此兩者結(jié)合，形成靛酚藍(lán)而顯示酶的部位。也可以用4—氨基—N、N—二甲基萘胺（AND）代替二甲基—對(duì)—苯二胺。

靛酚鹽法原理
    （3）靛藍(lán)形成法（indigo formatlon method）：又稱(chēng)靛藍(lán)法或吲哚酚法，在酶作用下，分解底物酯型吲哚酚化合物，產(chǎn)生出吲哚酚，在氧存在的情況下形成藍(lán)色靛藍(lán)，使酶存在部位顯色。

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