HL-60細胞

小牛血清 RPMI1640培養(yǎng)液 臺盼蘭 瓊脂 二甲基亞砜

超凈工作臺 二氧化碳培養(yǎng)箱 顯微鏡 培養(yǎng)瓶 吸管 酒精燈 血細胞計數(shù)板 多孔培養(yǎng)板

1.  收集對數(shù)生長期的HL-60細胞，先按實驗十三測定細胞活力，然后調整細胞濃度，制成300~1 000活細胞/ml 的細胞懸液。

2.  取二個培養(yǎng)瓶每個瓶中加9 ml 調整好濃度的細胞懸液，然后各加入1 ml 3%瓊脂（已融化，在65℃水浴中放置），迅速加入，混勻。

3.  用微量加樣器吸140 μl 二甲基亞砜（MDSO），加到一個瓶中，充分混勻，為實驗組，另一瓶不加DMSO，為空白對照組。

4.  取一個16 mm 多孔培養(yǎng)板，每孔加1 ml（35 mm 培養(yǎng)皿需加2 ml）細胞瓊脂懸液，勿有氣泡，將實驗組和對照組分兩組加好，蓋上蓋并作好標記。

5.  在室溫放置20分鐘使細胞瓊脂懸液凝固。

6.  然后移培養(yǎng)板或平皿于CO₂培養(yǎng)箱中37℃進行培養(yǎng)。

7.  培養(yǎng)7~10天，肉眼觀察并計數(shù)細胞集落。

8.  結果：以肉眼可見的細胞團（含500個以上細胞）作為計數(shù)集落的標準。對照組HL-60細胞在含0.3%的軟瓊脂培養(yǎng)基中生長良好，每個孔中可見有多個集落形成，而實驗組HL-60細胞因經(jīng)二甲基亞砜誘導分化，細胞在軟瓊脂中的集落形成明顯減少。

9.  集落的計數(shù)和計算：

（1）集落數(shù)=n孔中細胞集落數(shù)總和/n孔

（2）集落形成率=集落數(shù)/接種培養(yǎng)細胞總數(shù)×100%