細(xì)胞技術(shù)專題：人臍動脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

來源：上海北諾生物科技有限公司 2014年02月25日 11:39

標(biāo)簽：臍動脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)

人臍動脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)可以：（1）獲得人臍動脈平滑肌細(xì)胞；（2）作為重大動脈疾病的研究底物；（3）研究血管模型；（4）對血管疾病的藥理學(xué)和治療繼續(xù)提供信息。

實(shí)驗(yàn)方法

實(shí)驗(yàn)方法原理	運(yùn)用消化法進(jìn)行人臍動脈血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)，并用倒置顯微鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察和用免疫組化對培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。
實(shí)驗(yàn)材料	臍帶
試劑、試劑盒	膠原酶消化液胰蛋白酶膠原酶彈性蛋白酶 DMEM
儀器、耗材	眼科剪滴管離心機(jī) 培養(yǎng)皿 CO2培養(yǎng)箱
實(shí)驗(yàn)步驟	一、實(shí)驗(yàn)步驟 1. 冰冷無菌D-Hanks’液中漂洗，用眼科剪仔細(xì)清除脂肪、包膜、血管等組織，轉(zhuǎn)入青霉素小瓶中，加入少量無菌D-Hanks’液，用眼科剪剪成0.1-1.0 mm³大小的碎片。 2. 用滴管輕輕吸出上層細(xì)小脂肪碎塊和油滴，再用無菌D-Hanks’液反復(fù)清洗8~10 次。 3. 加入 10 倍體積無菌膠原酶消化液(1 mg/mL)，室溫消化30 min，1000 rpm離心 5 min，棄上清，加1 mg/mL胰蛋白酶 37℃消化 20 min，再次離心5 min，棄上清。 4. 加入胰蛋白酶 37℃消化20 min，再次離心5 min，棄上清。 5. 加膠原酶(1 mg/mL)彈性蛋白酶(0.5 mg/mL) 混合消化液 37℃消化 20 min，再離心5 min，棄消化液。 6. 加混合消化液 37℃消化 20 min，再次離心 5 min，細(xì)胞加含 10% FBS的DMEM培養(yǎng)基重懸，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)皿 37℃、5% CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)即可。

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