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如何選擇蛋白印跡實驗中的印跡膜

來源:德國賽多利斯集團   2014年02月27日 12:22  

硝酸纖維素膜(NC膜)是蛋白和核酸雜交zui常用的印跡膜,是蛋白印跡實驗的標準固相支持物。在低離子轉移緩沖液的環(huán)境下,大多數(shù)帶負電荷的蛋白質會與硝酸纖維素膜發(fā)生疏水作用而高親和力的結合在一起,雖然這其中的機制還不是十分清楚,但由于硝酸纖維素膜的這個特性,而且易于封閉非特異性結合,從而得到了廣泛的應用。目前市場上的NC膜產品數(shù)量眾多,品質參差不齊。

    從膜的質地上來看,zui重要的指標就是單位面積上能夠結合的蛋白的量。硝酸纖維素膜的結合能力主要與膜的硝酸纖維素的純度有關,市場上有些硝酸纖維素膜通常會還有大量的醋酸纖維素,因而降低了蛋白的結合量。如果采用的是100%純度的硝酸纖維素,保證了zui大的蛋白結合量,可達80-150μg/cm2。Sartorius的NC膜是致密的 100% 硝酸纖維素濾膜,是用于Western、Northern和Southern雜交的優(yōu)良濾膜。由于100%的純度,因而也大大減少了非特異性的結合,降低雜交背景,保證zui大的蛋白結合量,可達150-200μg /cm2。除此之外,Sartorius的NC膜質的精良,具有良好的韌性與強度。相比傳統(tǒng)的NC膜質地比較脆,漂洗一兩次就會破損,Sartorius的NC膜的優(yōu)勢就凸顯了出來,既能反復使用,又不易破損,是Western、Northern和Southern雜交實驗的*選擇。

    從膜的選擇上來看,根據(jù)被轉移的蛋白分子量大小,要選擇不同孔徑的硝酸纖維素膜。因為隨著膜孔徑的不斷減小,膜對低分子量蛋白的結合就越牢固。但是膜孔徑如果小于0.1mm,蛋白的轉移就很難進行了。因此,我們通常用0.45μm和0.2μm兩種規(guī)格的硝酸纖維素膜。大于20kD的蛋白就可以用0.45μm的膜,小于20kD的蛋白就要用0.2μm的膜了,如果用0.45μm的膜就會發(fā)生“Blowthrough”的現(xiàn)象。Sartorius的NC膜也有兩種可供選擇,幾乎能夠涵蓋大多數(shù)用戶的需求??讖綖?0.2 µm 的硝酸纖維素膜推薦用于轉印小分子蛋白和核酸,能避免由于膜轉移而導致的樣品損失;孔徑為 0.45 µm 的硝酸纖維素膜推薦用于轉印大分子蛋白和核酸以及大多數(shù)分析型印跡,包括蛋白ssDNA 和 RNA 轉印。

    從膜的使用上來看,市場上的NC膜有需要預處理才能使用的,也有不需要預處理可直接使用的。Sartorius的NC膜不需要經過無水甲醇預處理,膜僅需要在水中簡單潤濕,而后放入轉移緩沖液中。簡單操作就可以放心使用。

    因此, Sartorius的NC膜是相關雜交科研實驗的理想選擇。

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