保存方法:2-8℃保存。
有效期:一年。生產日期:見封口。
工作原理:
辣根過氧化物酶(HRP)的分子量(40000),它不會遮蓋抗原的結合部位,具有較高活性及特異性,可溶性佳,生成的產物不擴散,可作用于多種底物,產生不同顏色且HRP穿透力強,易進入細胞內。DAB在 H2O2存在的情況下,可以作為HRP的電子供體,產生褐色的不溶顆粒,可作為顯色的試劑。
試劑盒內容:
| 名稱 | 規(guī)格 |
1 | 5%BSA | 15mL |
2 | 二抗 | 0.5 mL(未稀釋的) |
3 | SABC | 15 mL |
4 | H2O 2 | 10 mL |
5 | DAB顯色液 | 10 mL |
6 | 枸櫞酸鹽緩沖液 |
|
操作步驟:
1、防脫片劑處理后的切片在二甲苯中脫蠟,然后系列酒精梯度入水,每次3~5 min。
2、0.01mol/L pH7.4 PBS洗滌3次,每次5 min 。
3、3%H 2 O 2 室溫孵育 5-10 分鐘,以消除內源性過氧化物酶的活性。PBS洗滌2-3次,每次5 min;
4、0.01mol/L pH6.0檸檬酸緩沖液(氣管在80~88℃,其他組織92℃)復性20min,在溶液中冷卻至室溫。0.01 mol/L pH7.4的PBS洗滌3次,每次5 min 。
5、加入封閉液,于濕盒中感作30min,甩去多余的封閉液。
6、滴加血清到切片上37℃孵育1小時左右或者4℃到第二天清晨, 0.01 mol/LpH7.4的PBS洗滌3次,每次5 min 。
7、滴加FITC或者HRP酶標二抗,覆蓋切片,置濕盒中37℃閉光感作30min左右,取出后洗滌(方法同上)。
8、DAB顯色。
9、蘇木素輕度復染。脫水,透明,封片。顯微鏡觀察。
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