酶標抗體僅需適當?shù)孜锖推胀ü鈱W顯微鏡即可高度敏感地檢出抗原。由于信號是通過吸收光的差異,而非發(fā)射光來檢測,底物的不溶性顯色產(chǎn)物分布在酶所在位置的周圍區(qū)域,因此這種檢測方法尚不能達到熒光技術的分辨率。
酶反應后出現(xiàn)沉淀,在酶所處位置周圍產(chǎn)生不溶性顯色產(chǎn)物,通過底物的顯色來檢出酶標試劑所處位置。多種酶及底物可供選擇,但近年來多選用辣根過氧化物酶(HRP)及底物二氨基聯(lián)苯胺(DAB)來進行培養(yǎng)細胞的染色。HRP可與抗Ig抗體、蛋白A、蛋白G、親和素或鏈霉親和素等共價偶聯(lián),其中任何一種二級試劑均可用于檢測與目標抗原結合的一抗的位置。
細胞染色法如果實驗要求操作簡單,用同一條件觀察大量樣品,用酶聯(lián)檢測法較好;如實驗要求高分辨率,則應用熒光素標記檢測法;共聚焦顯微鏡比相差顯微鏡具有更高的分辨率。如考慮敏感性,選用共聚焦顯微鏡法,再依次為酶聯(lián)法及熒光顯微鏡法。如考慮到價格因素,則酶聯(lián)法為。
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