腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)方法

腫瘤細(xì)胞的特點

細(xì)胞保持永生性：自我復(fù)制

形態(tài)學(xué)：大小不一  ~ 逐漸一致

增殖力更強：DNA合成期、分裂期達(dá)50%

突變性：不同于正常細(xì)胞，失去穩(wěn)定的控制高分化 變低分化

表面性狀：負(fù)電荷數(shù)量>正常，貼壁性¯，抗原性可變異

成瘤性：移植到動物體內(nèi)可成瘤

腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)：

與常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)相同。一個細(xì)胞群體，存在多種亞群，復(fù)雜性，建株細(xì)胞較正常細(xì)胞易于培養(yǎng)，不同亞群代表不同分化程度的細(xì)胞群表型、形態(tài)、受體、對因子的反應(yīng)等均不同，不同亞群釋放不同的正負(fù)調(diào)節(jié)因子 (陰陽調(diào)控)。

影響腫瘤細(xì)胞生長的因素：

• PH
• 營養(yǎng)：如血清效價低
• 細(xì)胞生長因子的自分泌及旁分泌
• 癌基因抑癌基因的變化
• 排泄廢物的影響
• 細(xì)胞外基質(zhì)的作用
• 細(xì)胞相互間的作用
• 污染

原代培養(yǎng)：去除纖維細(xì)胞及淋巴細(xì)胞，防止細(xì)菌、真菌污染。

傳代培養(yǎng)：增殖力低的細(xì)胞需要飼養(yǎng)，細(xì)胞適當(dāng)密度, 基本長滿后傳代, *代不穩(wěn)定，注意培養(yǎng)條件，適當(dāng)調(diào)整培基。

腫瘤治療的研究：

治療藥物敏感性的鑒定與篩選

腫瘤的多藥耐藥性的鑒定

各種新藥治療的實驗研究

體外：腫瘤的生長（³HTdr摻入）腫瘤的殺傷率（MTT、⁵¹Cr釋放）

體內(nèi)：裸鼠或免疫功能抑制鼠，成瘤率、抑瘤、生長率、轉(zhuǎn)移率、生存時間及死亡率作用機理的研究：基因、蛋白、酶、標(biāo)志、受體

腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用：

腫瘤細(xì)胞的遺傳特性：各種癌基因及抑癌基因的分析、染色體定位（FISH法）

腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)行為：細(xì)胞周期（FACS)、信號傳遞

腫瘤細(xì)胞的標(biāo)志與激素、受體變化（免疫細(xì)胞化學(xué)、放射自顯影、酶免疫、熒光免疫、放射免疫、免疫印跡

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