細胞傳代標準化流程:
穿戴好白大褂和手套,用75%酒精擦手;
- 取出細胞,顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和密度,確定細胞生長狀況,是否需要傳代或換液;
- 將培養(yǎng)基(如有需要還有血清和大瓶高糖培養(yǎng)基)、PBS、胰酶培養(yǎng)基等預熱及超凈臺消毒結束后,將試劑及細胞等噴酒精后移入超凈臺,將廢液缸噴足酒精移入超凈臺,取酒精棉放入超凈臺;
- 點燃酒精燈,將瓶口擰松,過火消毒;
- 在確定細胞生長狀況良好且沒有污染的情況下,將培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基?。ù笈囵B(yǎng)皿6ml, 中培養(yǎng)皿3ml)至一個新的15ml離心管中;(一個1ml槍頭)
- 用適量PBS清洗細胞表面(大皿5ml,中皿3ml),并棄去PBS;(一個5ml槍頭)
- 加入適量胰酶消化細胞(大皿1ml,中皿0.5ml),此時可將細胞置于37°C細胞培養(yǎng)箱內消化;(C2C12用5min,3T3-L1用1.5min),(一個1ml槍頭)
- 待消化*后,用胰酶6倍體積的*培養(yǎng)基中止消化,并吹打培養(yǎng)皿皿底,將細胞移入離心管;(一個5ml槍頭)
- 1000rpm,5min離心,離心間隙可以準備好傳代的細胞培養(yǎng)皿,并加好培養(yǎng)基;
- 棄上清,口擦酒精,燒口;
- 加適量*培養(yǎng)基吹打混勻細胞(沿壁輕輕吹打24次左右),按合適比例進行細胞傳代,在蓋上標記好細胞名稱、代數(shù)及傳代日期并放入孵箱。(一個1ml槍頭)
- 將所有試管收至冰箱,將廢液缸及廢液取出,裝至一次性PE手套,廢液缸噴酒精清洗
- 用酒精棉仔細擦拭操凈臺表面,檢查顯微鏡、離心機是否關閉,孵箱是否正常;
- 做試驗記錄,打開超凈臺和細胞間紫外,15min后關閉
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