血清[serum]質(zhì)量決定因素和使用建議

一、關(guān)于血清使用的幾點(diǎn)建議：

1、血清必須貯存-20℃，如存放于4℃，請(qǐng)勿超過兩周，對(duì)于某些單位一次無法用完一瓶，可在無菌條件下將其40-45ml分裝于無菌50ml離心管中(或血清瓶中)，由于血清解凍時(shí)體積會(huì)增加10％，必須預(yù)留此膨脹體積的空間，否則易發(fā)生污染或容器凍裂的情形。

2、一般公司所提供的血清一般為200ml和500ml裝量，因此建議在使用中宜采取逐步解凍的方法解凍血清：-20℃→4℃冰箱或冷庫溶解24小時(shí)→室溫下全溶后再分裝，一般以50 ml無菌離心管中分裝40-45ml。使用過程中要特別注意，必須規(guī)則地將血清搖晃均勻，小心勿造成氣泡，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由 -20℃放置至37℃環(huán)境下解凍，因?yàn)闇囟雀淖兲?，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而產(chǎn)生沉淀。

3、血清的滅活(heat-inactivation)一般是指56℃，30分鐘水浴加熱已*解凍的血清，加熱過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。此處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分(complement)去活化。但是，經(jīng)過滅活處理的血清會(huì)因而造成沉淀的顯著增多，且會(huì)影響血清的品質(zhì)。所以，有的公司所生的細(xì)胞培養(yǎng)用牛血清不做滅活處理，由客戶自行選擇。而診斷試劑用血清在除菌過濾前進(jìn)行過滅活處理。

4、在使用血清的時(shí)候，勿將血清留置于37℃太久，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分會(huì)因而受到破壞，影響血清的品質(zhì)。

5、一般我們?cè)谑褂眠^程中是先過濾培養(yǎng)基，再加血清，勿直接過濾血清。

6、血清的沉淀物：

(1)凝絮物：其產(chǎn)生的原因有多種，但普遍的原因是血清中的脂蛋白(lipoprotein)變形及解凍后血清中存在的纖維蛋白(fibrin)造成，這些凝絮沉淀物不會(huì)影響血清本身的品質(zhì)。除非必須，如果您想減少這些沉淀物，建議可用離心3000rpm，5min去除，或離心后取上清液加入培養(yǎng)基中一起除菌過濾。

(2)顯微鏡下觀察“小黑點(diǎn)”，通常經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì)顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點(diǎn)”，常會(huì)誤認(rèn)為是血清遭受污染(如黑膠蟲)，而將血清放置在37℃中欲培養(yǎng)此“微生物”，但37℃環(huán)境下，又會(huì)使此沉淀物增多，更會(huì)誤認(rèn)為微生物的增殖，但以培養(yǎng)細(xì)菌的培養(yǎng)基檢測(cè)，又沒有污染。一般而言，此小黑點(diǎn)不會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)。

二、血清質(zhì)量的決定因素：

1、關(guān)于牛種：

血清質(zhì)量與牛種沒有必然的，但有其先天條件。

首先，澳大利亞、新西蘭的牛源之所以被*為，原因是這些國(guó)家的牛源是“無污染”的，“無污染”的實(shí)際含義是：病毒等外源因子污染較少。至于美國(guó)，由于其國(guó)內(nèi)出現(xiàn)了瘋牛病，其形象由此受到挑戰(zhàn)。這種血清安全性的觀念在發(fā)達(dá)國(guó)家認(rèn)知度較高，而在我國(guó)還不夠重視。其次，牛所能獲得的營(yíng)養(yǎng)對(duì)血清質(zhì)量有影響。在我國(guó)，由于飼養(yǎng)條件的不同，不同地區(qū)產(chǎn)的血清質(zhì)量是有差異的。

2、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)件的問題：

我國(guó)對(duì)人用生物制品生產(chǎn)所用的牛血清制定了國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，載于《中國(guó)生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》2000年版，此標(biāo)準(zhǔn)已接近于國(guó)外胎牛血清的有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。內(nèi)毒素：國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)件為不高于10Eu/ml，內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)件為不高5Eu/ml或10Eu/ml。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)之外的質(zhì)控指標(biāo)還有：免疫球蛋白、牛腹瀉病毒 (BVDV)抗體、激素、和牛源安全性驗(yàn)證等。

3、牛血清的命名和選擇：

一般公司對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)用牛血清的命名分二類：胎牛血清和小牛血清。對(duì)于一般的細(xì)胞系，小牛血清可以培養(yǎng)得很好。

三、關(guān)于牛血清白蛋白的生產(chǎn)工藝：

牛血清白蛋白的制備方法有Cohn's法、鹽析法、熱變性法等多種工藝。不同的生產(chǎn)工藝其產(chǎn)品的名稱、質(zhì)量指標(biāo)、應(yīng)用領(lǐng)域等各不相同。

其中Cohn's法設(shè)備、工藝要求比較高，相對(duì)應(yīng)的生產(chǎn)成本較高，但產(chǎn)品質(zhì)量較好。牛血清組份V(FrationV)就是由Cohn's法制備的。一般白蛋白純度96-99%、外觀潔白、結(jié)晶性狀好、1%蛋白水溶液PH7.0±0.2，再根據(jù)不同的應(yīng)用分成低內(nèi)毒素、低脂肪酸等等的不產(chǎn)品，主要應(yīng)用于細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的無血清培養(yǎng)基中。鹽析法因生產(chǎn)周期長(zhǎng)，純度低和產(chǎn)品聚合體高、穩(wěn)定性低等缺陷已很少應(yīng)用。

目前國(guó)內(nèi)應(yīng)用比較普遍的是熱變性法，結(jié)合較先進(jìn)的超濾生產(chǎn)工藝，其工藝要求相對(duì)較低，制備成本低，其缺點(diǎn)是目前應(yīng)用領(lǐng)域比較單一，僅供免疫診斷試劑使用。