原理：

細(xì)胞傷口愈合實驗被研究者廣泛應(yīng)用和改進，用來研究各種實驗條件比如基因敲除和化療在細(xì)胞遷移和增殖中的作用。該實驗操作簡單，費用廉價，實驗條件容易根據(jù)不同的目的改進。該方法的基本原理是，在單層培養(yǎng)細(xì)胞間制作劃痕以產(chǎn)生愈傷區(qū)域，然后監(jiān)控該傷口周圍細(xì)胞的向劃痕遷移的現(xiàn)象，即傷口愈合。改變細(xì)胞遷移和/或生長的因素可以增加或降低傷口愈合率。該方法可以定量，適用于自動化系統(tǒng)高通量篩選。

材料和儀器：

1.人MDA-MB-231cell(ATCC#HTB-26)

2.DMEM培養(yǎng)基(Invitrogen#10313-021)

3.胎牛血清(ATCC#30-2020)

4.PBS(Invitrogen#14190-144)

5.BD24孔細(xì)胞培養(yǎng)板(Fisher#08-772-1H;BD#353226)

6.Raininpipettips,1ml(Rainin#GPS-L1000)

7.戊二醛(Sigma-Aldrich#G6257)

8.乙醇(Sigma-Aldrich#459836)

9.結(jié)晶紫(Sigma-AldrichC3886)

10.細(xì)胞培養(yǎng)儀：37°Cand5%CO2

步驟：

1.細(xì)胞在含有10%FBS的DMEM培養(yǎng)基中生長。

2.細(xì)胞以一定密度接種到24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，生長24小時后，單層細(xì)胞融合度應(yīng)達到70-80%。

3.不要更換培養(yǎng)基。用新的1ml槍頭輕輕的在單層培養(yǎng)細(xì)胞間劃痕，劃痕橫穿過孔，槍頭盡量與板孔的底部垂直，不要傾斜。這樣產(chǎn)生的gap的距離才與槍頭末端的外直徑相等。Gap的距離可以選用不同型號的槍頭調(diào)節(jié)。劃痕在同一方向成一條直線。

4.在垂直與*條劃痕的方向制作另一條劃痕，每孔劃痕成十字交叉型。

5.劃痕后，用培養(yǎng)基輕輕的清洗板孔2次，以去除脫落細(xì)胞。

6.每孔添加新鮮培養(yǎng)基。

7.(培養(yǎng)基中含有某些成分，如抑制/促進細(xì)胞遷移和/或增殖的化學(xué)物質(zhì))

8.細(xì)胞生長48小時(或根據(jù)時間需要).

9.1xPBS清洗細(xì)胞兩次，然后使用3.7%多聚甲醛固定30分鐘。

10.10.1%的結(jié)晶紫（2%乙醇溶解）染色30分鐘。

11.染色的單層細(xì)胞選取不同的視野，顯微鏡拍照。gap的距離可通過Photoshop或ImagJ軟件測量.為了降低實驗結(jié)果的可變性，建議每孔選擇多個視野觀察，每組做多個重復(fù)。