HePG2細(xì)胞和L-02細(xì)胞的傳代：HePG2細(xì)胞屬人肝腫瘤的恒生細(xì)胞株，L-02細(xì)胞則是人胎肝細(xì)胞株，二者所使用的培養(yǎng)基可以是一樣的，即zui常見(jiàn)的DMEM。一干使用低糖的。
細(xì)胞長(zhǎng)滿培養(yǎng)瓶時(shí)既要傳代。使用胰酶消化即可。用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶。使用前37度預(yù)熱，細(xì)胞經(jīng)PBS清洗兩遍后，每個(gè)中號(hào)培養(yǎng)瓶加0.7ml的胰酶，胰酶的量可根據(jù)自己培養(yǎng)瓶的大小而定，原則就是能夠蓋滿瓶底。加入胰酶以后，為使酶的活性zui大，將培養(yǎng)瓶蓋擰緊后放回培養(yǎng)箱中，3分鐘左右即用含血清的培養(yǎng)基終止消化。如果在室溫情況下消化，時(shí)間相應(yīng)加長(zhǎng)，可以在顯微鏡下觀察，當(dāng)細(xì)胞界限已十分清楚，即已分離為單個(gè)細(xì)胞，且有少量細(xì)胞漂起，則要終止消化了。

16HBE細(xì)胞株的傳代方法：
鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)融合達(dá)70-80%，準(zhǔn)備傳代。常規(guī)開(kāi)紫外照射超凈臺(tái)20分鐘，同時(shí)把含10%胎牛血清的MEM培養(yǎng)基、0。25%胰酶、PBS放置37度培養(yǎng)箱中孵育。20分鐘后開(kāi)始傳代。先棄掉舊培養(yǎng)液，加PBS洗一次，然后加0。25%胰酶2ml消化（指25乘25cm大小的培養(yǎng)瓶）細(xì)胞，鏡下觀察細(xì)胞，細(xì)胞突起回縮，細(xì)胞變圓，然后將培養(yǎng)瓶放置37度二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育3分鐘左右（當(dāng)然時(shí)間是隨機(jī)的，比如：新配的胰酶作用時(shí)間短一些，配制時(shí)間長(zhǎng)的胰酶作用時(shí)間會(huì)長(zhǎng)一些，當(dāng)然要不斷地鏡下觀察），待細(xì)胞大部分消化下來(lái)（大部分細(xì)胞呈流沙狀脫離瓶壁），加4ml含10%胎牛血清的MEM培養(yǎng)基終止消化。反復(fù)吹打瓶壁上殘留的細(xì)胞，并將已消化下來(lái)的細(xì)胞吹打均勻，然后吸入離心管中1000轉(zhuǎn)離心1分鐘，然后棄掉上清，用手指將離心管中的細(xì)胞彈打均勻，加新培養(yǎng)基，吹打均勻，分至3個(gè)新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液。將培養(yǎng)瓶平放，小心移入37度二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)置夜。次日觀察。

胃癌細(xì)胞AGS和SGC-7901的培養(yǎng)：細(xì)胞傳代時(shí)不能長(zhǎng)的太滿,70%-80%就可以傳了.實(shí)驗(yàn)前先把紫外燈打開(kāi)照30分鐘,然后再把鼓風(fēng)機(jī)開(kāi)10分鐘,同時(shí)把培養(yǎng)液和胰酶放入37度水浴箱中,千萬(wàn)記住不要蓋上水浴箱的蓋子.傳代時(shí),我一般把培養(yǎng)瓶口過(guò)一下火,就直接把培養(yǎng)液到去,再用0.25%的胰酶(不含EDTA)消化.等細(xì)胞變圓,細(xì)胞間空隙加大就直接把培養(yǎng)液到去,不用離心,然后再吹打,雖說(shuō)要輕柔,但很難吹打成單細(xì)胞懸液,所以稍用力也沒(méi)有關(guān)系.雖然操作不規(guī)范,但節(jié)省時(shí)間,細(xì)胞也沒(méi)有被污染.

AAV-293細(xì)胞的傳代:
AAV-293細(xì)胞較喜歡成團(tuán)生長(zhǎng),比較嬌嫩,怕冷,傳代時(shí)不要一次從二氧化碳培養(yǎng)箱拿出很多瓶,一次只要拿2-3瓶出來(lái)傳就可以了,否則細(xì)胞很容易死掉.細(xì)胞在50-60%傳代,細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài).
用D-Hank's液配制成0.25%的胰酶消化半分鐘左右,棄去胰酶.觀察培養(yǎng)瓶是否有針孔樣縫隙,如有就可以加入培養(yǎng)液吹打細(xì)胞.消化過(guò)久,對(duì)細(xì)胞損害很大,而且成團(tuán)很難吹打成單個(gè)細(xì)胞.然后加入含有10%小牛血清的DMEM.輕輕放入二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng).

皮膚成纖維細(xì)胞和THP-1細(xì)胞：皮膚成纖維細(xì)胞是貼壁生長(zhǎng)的。THP-1細(xì)胞是懸浮的。
由于我們實(shí)驗(yàn)室養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)間也不是很長(zhǎng)，所以也只能說(shuō)說(shuō)自己平時(shí)的操作了。
先說(shuō)皮膚成纖維細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞鋪滿瓶底，也就是細(xì)胞與細(xì)胞之間沒(méi)有間隙時(shí)，就可以傳代了。一般十天左右傳一代。先吸棄舊培養(yǎng)液，用D-Hanks液洗兩遍，再加入0.25%的胰酶，加入的量以能覆蓋瓶底為準(zhǔn)。加入后輕輕搖晃培養(yǎng)瓶使液體覆蓋瓶底，然后靜置兩分鐘左右，是能在顯微鏡下觀察，當(dāng)細(xì)胞之間出現(xiàn)間隙且有一部分細(xì)胞呈現(xiàn)圓形后即可。吸去胰酶，加入含血清培養(yǎng)液，搖晃瓶子使培養(yǎng)液覆蓋瓶底就行了。因?yàn)檠蹇梢越K止胰酶的消化。然后吹打瓶底各處使細(xì)胞脫落。再分瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液。
THP-1細(xì)胞的傳代就比較簡(jiǎn)單了?？梢杂袃煞N傳代方法。如果鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)很好，沒(méi)有其它雜質(zhì)即細(xì)胞裂解物之類(lèi)的，就可以采用直接傳代法。傳代前將細(xì)胞培養(yǎng)瓶直立一個(gè)半小時(shí)使細(xì)胞自然下沉。吸棄上層少量培養(yǎng)液約三分之一，將余下的培養(yǎng)液分成兩瓶，再分別補(bǔ)加培養(yǎng)液即可。如果鏡下觀察覺(jué)得培養(yǎng)液中有雜質(zhì)即可采用離心傳代法。如果細(xì)胞數(shù)目較多可以低速離心約600轉(zhuǎn)離心六分鐘，細(xì)胞可以沉淀下來(lái)而且可以去除細(xì)胞碎片之類(lèi)的雜質(zhì)。如果覺(jué)得細(xì)胞數(shù)目不多比較寶貴，那就提高轉(zhuǎn)速可以1000轉(zhuǎn)離心六分鐘，這樣細(xì)胞損失很少但可能也有些雜質(zhì)會(huì)一起沉淀下來(lái)。離心后去除上清液，加入新的培養(yǎng)液吹打渾勻即可分瓶傳代了。
目前的方法就這些，希望對(duì)新手有所幫助

BHK－21的經(jīng)驗(yàn)：
吸出培養(yǎng)基，吸得越干凈越好，直接加入1ml胰酶（T－25瓶），放到37度培養(yǎng)箱消化。是否需要用hanks 或 pbs之類(lèi)得緩沖洗細(xì)胞并不必要，我都沒(méi)有洗，感覺(jué)應(yīng)該洗一下更好，但也更麻煩并增加了污染得可能性。如果細(xì)胞長(zhǎng)得太老，可以先加入1ml胰酶在細(xì)胞表面浸潤(rùn)一下就吸出來(lái)，然后再加入1ml胰酶消化。胰酶在使用前預(yù)熱到37度。由于胰酶平時(shí)保存在4度，反復(fù)預(yù)熱對(duì)胰酶的活性不好，我的經(jīng)驗(yàn)是將胰酶進(jìn)行分裝，盡可能避免胰酶反復(fù)冷卻加熱。消化時(shí)間的選擇要根據(jù)實(shí)際情況決定，BHK－21還是比較好消化的，5－15min應(yīng)該足夠了，消化時(shí)間太長(zhǎng)對(duì)細(xì)胞不利?？梢栽陲@微鏡下觀察消化情況，必要時(shí)可以拍打培養(yǎng)瓶幫助細(xì)胞分散，消化結(jié)束后直接加入培養(yǎng)基即可，胰酶會(huì)被血親滅活。一般在T－25瓶中留7－8ml培養(yǎng)基培養(yǎng)。在90％單層細(xì)胞時(shí)，1：4傳代2天后可長(zhǎng)滿。如果使用的培養(yǎng)基偏堿先放在CO2培養(yǎng)箱中平衡。細(xì)胞生長(zhǎng)中注意觀察培養(yǎng)基顏色（加入酚紅作指示劑），如出現(xiàn)偏黃表明細(xì)胞代謝產(chǎn)酸較多，此時(shí)如細(xì)胞未長(zhǎng)滿應(yīng)更換部分或全部培養(yǎng)基以確保細(xì)胞狀態(tài)不受影響。

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