酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA) 即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面,使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行的技術。該技術可用于檢測大分子抗原和特異性抗體等,具有快速、靈敏、簡便、載體易于標準化等優(yōu)點。
1總述
酶聯(lián)免疫吸附測定法
1971年瑞典學者Engvail和Perlmann,荷蘭學者Van Weerman和Schuurs分別報道將免疫技術發(fā)展為檢測體液中微量物質(zhì)的固相免疫測定方法,即酶聯(lián)免疫吸附測定法 (enzyme-linked immunosorbent assay , ELISA) 。ELISA已成為分析化學領域中的前沿課題 ,它是一種特殊的試劑分析方法,是在免疫酶技術( immunoenzymatic techniques ) 的基礎上發(fā)展起來的一種新型的免疫測定技術 。
2基本原理
它采用抗原與抗體的特異反應將待測物與酶連接,然后通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應,用于定量測定。測定的對象可以是抗體也可以是抗原。
在這種測定方法中有3種必要的試劑:①固相的抗原或抗體(免疫吸附劑) ②酶標記的抗原或抗體(標記物)③酶作用的底物(顯色劑)
測量時,抗原(抗體)先結合在固相載體上,但仍保留其免疫活性,然后加一種抗體(抗原)與酶結合成的偶聯(lián)物(標記物),此偶聯(lián)物仍保留其原免疫活性與酶活性,當偶聯(lián)物與固相載體上的抗原(抗體)反應結合后,再加上酶的相應底物,即起催化水解或氧化還原反應而呈顏色。
其所生成的顏色深淺與欲測的抗原(抗體)含量成正比。 這種有色產(chǎn)物可用肉眼、光學顯微鏡、電子顯微鏡觀察,也可以用分光光度計(酶標儀)加以測定。其方法簡單,方便訊速,特異性強。
3分類
該法由種類和變化可分為以下幾種:
(一)雙抗體夾心法
(二)間接法
(三)競爭法
(四)雙位點一步法
(五)捕獲法測IgM抗體
(六)應用親和素和生物素的ELISA
4特點
該法相較其他方法而言,有幾大特點
靈敏性高
該測定法的靈敏度來自作為報告集團的酶。*, 酶是一種有機催化劑,很少量的酶即可誘導大量的催化反應 ,產(chǎn)生可供觀察的顯色反應現(xiàn)象。因此該體系常被稱為酶放大體系。ELISA實現(xiàn)了在細胞或亞細胞水平上示蹤抗原或抗體的所在部位,或在微克、甚至納克水平上對其進行定量。
特異性強
其特異性來自抗體或抗原的選擇性??乖贵w的結合實質(zhì)上只發(fā)生在抗原的抗原決定簇與抗體的抗原結合位點之間。由于兩者在化學結構和空間構型上呈互補關系,所以抗原抗體反應具有高度的特異性。
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