實(shí)驗(yàn)室常用試劑的配制：無(wú)Ca2+、Mg2+ Hanks液、Hanks液(原液)、甲基紅試劑、0.4%酚紅溶液、pH7.2 Tris-NH4CI溶液(紅細(xì)胞崩解液)、0.05moI/L pH8.6 巴比妥緩沖液、磷酸鹽緩沖液 (PBS)、0.1mol/L PH8.4 硼酸緩沖液(BBS)、0.05mol/L pH9.6 碳酸緩沖液、0.01mol/L pH7.4 PBS內(nèi)含2%BSA(牛血清白蛋白)、底物溶液、清潔液的配制、柯氏試劑(靛基質(zhì)試劑)。

1. 無(wú)Ca2+、Mg2+ hanks液

NaCl 4.5g

KCl 0.2g

NaHCO3 0.175g

Na2HPO4·12H2O 0.076g

KH2PO4 0.03g

葡萄糖 0.5g

0.4%酚紅 2.5ml

將上述成分依次溶解或加入到雙蒸水中, zui后補(bǔ)加雙蒸水至500ml, 以5.6%NaHCO3 調(diào)整 pH 值至7.4，4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

2. hanks液(原液)

原液甲： NaCl 160g

KCl 8g

MgSO4·7H2O 2g

MgCl2·6H2O 2g

上述試劑加入800ml雙蒸水。溶解。

CaCl2 2.8g溶于100ml雙蒸水

上述二液混合，加雙蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。

原液乙： Na2NPO4·12H2O 3.04g

KH2PO4 1.2g

葡萄糖 20g

加入800ml雙蒸水，溶解。

0.4%酚紅溶液100ml

上述二液混合，加雙蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。

使用時(shí)甲,乙原液按下列比例配成 Hanks液 使用液：原液甲1份、原液乙1份、雙蒸水18份濾過(guò)，8磅20min滅菌，放4℃冰箱保存，使用前用NaHCO3調(diào)整PH值。

3.甲基紅試劑

(1)成份

甲基紅 0.1g 蒸餾水 200ml

95%乙醇 300ml

(2)用途：測(cè)定甲基紅反應(yīng)。

4.0.4%酚紅溶液

稱取0.4g酚紅置研缽中研碎，逐漸加入0.lmol/LNaOH并不斷研磨，直到所有的顆粒幾乎*解，加入0.lmol/LNaOHl0ml，然后倒入容量瓶中，并加蒸餾水至l00ml,棕色瓶保存?zhèn)溆谩?/p>

5.pH7.2 Tris-NH4CI溶液(紅細(xì)胞崩解液)

Tris (三羥甲基氨基甲烷) 1.03g

NH4Cl(氯化氨) 3.735g

加雙蒸水至500ml，用濃HCl調(diào)pH=7.2，10磅15min滅菌后放4℃保存。

6.0.05moI/L pH8.6 巴比妥緩沖液

巴比妥 1.84g

加蒸餾水 200ml 加熱溶解

巴比妥納 10.3g

疊氮納 0.2g

加蒸餾水溶解 , 并補(bǔ)加到 1000ml 。

7.磷酸鹽緩沖液 (PBS)

A 液：為 0.2mol/L 磷酸二氫鈉水溶液 ,NaH2PO4 · H2O 27.6g, 溶于蒸餾水中, zui后補(bǔ)加蒸餾水至 1000ml 。

B 液：為 0.2mol/L 磷酸氫二鈉水溶液 ,Na2HPO4.7H2O 3.6g(或 Na2HPO4·12H2O 71.6g, 或Na2HPO4 · 2H2O 35.6g ), 加蒸餾水溶解，zui后加水至 1000ml。若再加蒸餾水至200ml則成為0.1mol/LPB。

8.0.1mol/L PH8.4 硼酸緩沖液(BBS)

硼酸鈉(Na2B4O7.10H2O) 0.46g

硼酸(H2BO3) 0.51g

加蒸餾水至100ml 溶解。

9.0.01mol/L PH7.4 磷酸鹽緩沖液(PBS)

配制方法一：

0.2mol/L Na2HPO4( Na2HPO4·12H2O 71.6g加蒸餾水至1000ml)

0.2mol/L NaH2PO4(NaH2PO4·2H2O 35.6g加蒸餾水至1000ml)

取0.2mol/L Na2HPO4 81.0ml 加0.2mol/L NaH2PO4 19ml,再加1900mlH2O和17gNaCl即為PH7.4 0.01mol/L PBS。

PH7.4 0.01mol/L PBS再加入0.05%Tween-20即為ELISA試驗(yàn)的洗滌液。

配制方法二：

甲液(0.1mol/LKH2PO4溶液)：KH2PO413.608g，加蒸餾水至1000ml。

乙液(0.1mol/L Na2HPO4溶液)：Na2HPO435.814g，加蒸餾水至1000ml。

取甲液19ml，乙液81ml NaCl8.5g、Tween-20 0.5ml混合后加蒸餾水至1000ml即可。再加入0.05%Tween-20即為ELISA試驗(yàn)的洗滌液。

10.0.05mol/L pH9.6 碳酸緩沖液

Na2CO3 1.59g

NaHCO3 2.93g

加蒸餾水至1000ml。ELISA實(shí)驗(yàn)包被用。

11.0.01mol/L pH7.4 PBS內(nèi)含2%BSA(牛血清白蛋白)

取BSA2ml加0.01mol/L pH7.4PBS至100ml即可。ELISA實(shí)驗(yàn)封閉用。

12.PH5.0 磷酸-檸檬酸緩沖液

0.2mol/L Na2PO4(28.4g/L) 25.7ml

0.1mol/L檸檬酸(19.2g/L) 24.5ml

加蒸餾水至100ml即為pH 5.0磷酸-檸檬酸緩沖液。

13.底物溶液

pH5.0磷酸-檸檬酸緩沖液加入鄰苯二胺1mg/ml，再加入30%的H2O2 (1μl/ml)溶解后即為ELISA底物液，臨用前配制，避光保存。

14.2mol/L 硫酸

濃H2SO4(36N)取 1ml36N的H2SO4緩緩加入18 ml蒸餾水內(nèi)即為2mol/L，用于ELISA實(shí)驗(yàn)終止反應(yīng)。

15.清潔液的配制

清潔液分高、中、低液三種。

低濃度清潔液

重鉻酸鉀 100g

水 750ml

硫酸 250ml

中濃度清潔液

重鉻酸鉀 60g

水 300ml

硫酸 460ml

高濃度清潔液

重鉻酸鉀 100g

水 200ml

硫酸 800ml

先將重鉻酸鉀倒入自來(lái)水中，然后加入濃硫酸，邊加硫酸邊用玻璃棒攪拌。由于加入濃硫酸后產(chǎn)生高熱，故加酸時(shí)要慢，溶器應(yīng)用耐酸耐高溫塑料或陶器制品。

配制好的清潔液，應(yīng)存于有蓋的玻璃溶器內(nèi)。需要浸泡的玻璃器皿一定要干燥，如果清潔液經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期使用已呈黑色，表明已經(jīng)失效，不宜再用。由于清潔液有強(qiáng)腐蝕性，故操作時(shí)要十分注意。

16.柯氏試劑(靛基質(zhì)試劑)

(1)成份

純戊醇 150ml

濃鹽酸 50ml

對(duì)二甲基氨基苯甲醛 10g

(2)制法：將對(duì)二甲基氨基苯甲醛加入純戊醇內(nèi)，使其溶解。將濃鹽酸一滴滴慢慢加入，邊加邊搖，不能加得太快，以致溫度升高溶液顏色變深。

(3)用途：測(cè)定細(xì)菌能否產(chǎn)生吲哚。

17.PH6.4 l/l5mol/ml 磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)

(1)l/l5mol/ml 磷酸二氫鉀溶液

KH2PO4 9.04g

蒸餾水 加至1000ml

(2)l/l5mol/ml 磷酸氫二鈉溶液

Na2HPO4·2H2 O 11.87g

(或 Na2HPO4·l2H2 O 23.86g

蒸餾水 加至1000ml

(3)PH6.4 l/l5mol/ml 磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)

l/l5mol/ml磷酸二氫鉀溶液 73ml

l/l5mol/ml磷酸氫二鈉溶液 27ml

NaCl 0.5g

混勻溶解即可。

磷酸鹽緩沖液可用于細(xì)胞培養(yǎng)、ELISA檢測(cè)、免疫組化、有機(jī)溶劑等實(shí)驗(yàn)中，主要是作用防止溶液pH變化和溶劑，磷酸鹽緩沖液試劑主要由有氯化鈉、磷酸鹽、磷酸鹽、氯化鉀和磷酸鉀組成。