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PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)說明
| PCR實(shí)驗(yàn)室要求 1 實(shí)驗(yàn)室功能分區(qū) 1.1 實(shí)驗(yàn)室原則上應(yīng)分為4個(gè)獨(dú)立工作區(qū),實(shí)分三個(gè)獨(dú)立工作區(qū) 試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品處理區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)，并設(shè)在不同房間。前兩區(qū)為擴(kuò)增前區(qū)，后區(qū)為擴(kuò)增后區(qū)。各區(qū)的功能是： 1.1.1 試劑準(zhǔn)備區(qū)：擴(kuò)增試劑的配制、分裝和保存。 1.1.2 樣品處理區(qū)：樣品登記、分裝；核酸提取、保存和加樣。 1.1.3 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增產(chǎn)物的測定、結(jié)果分析、登記及報(bào)告。 1.2 擴(kuò)增前區(qū)與擴(kuò)增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開，須使用不同的房間，兩區(qū)之間有一定的間隔。 1.3 使用商品化試劑盒可在樣品處理區(qū)進(jìn)行少量試劑配制。 1.4 在滿足下列操作和清潔處理要求的前提下樣品處理區(qū)和試劑準(zhǔn)備區(qū)可設(shè)在同一房間內(nèi)： 1.4.1 在生物安全柜內(nèi)操作。 1.4.2 每個(gè)實(shí)驗(yàn)人員、實(shí)驗(yàn)組分別使用各自的試劑及耗材。 1.4.3 盛放污染材料的器皿密封并一次性使用。 1.4.4 用有效的方法對操作區(qū)域和共享器具在實(shí)驗(yàn)前后進(jìn)行清潔及消毒。推薦的程序是： （1）實(shí)驗(yàn)前將次氯酸鈉溶液或70%乙醇涂布于操作臺或器具表面，兩分鐘后用紙巾擦除。 （2）移入盛放污染材料的器皿、所需的試劑、耗材和樣品，進(jìn)行試驗(yàn)。 （3）一個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域在同一時(shí)間段只進(jìn)行一種實(shí)驗(yàn)。 （4）實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，移出個(gè)人材料至個(gè)人區(qū)域保管；封好污染材料盛放器皿并移至污物袋；移出共享器具至專門區(qū)域保管；將次氯酸鈉溶液或70%乙醇涂布于操作臺或器具表面，兩分鐘后用紙巾擦除；打開紫外燈照射至少15min。 1.5 各區(qū)域的儀器、設(shè)備、器具、工作服和試劑應(yīng)為該區(qū)，不得交叉使用。 2 人員 進(jìn)行HIV核酸檢測的人員須具有艾滋病實(shí)驗(yàn)室的上崗資格，并接受過省級以上艾滋病實(shí)驗(yàn)室安全及實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)培訓(xùn)。 3 設(shè)施和設(shè)備 3.1 根據(jù)檢測項(xiàng)目配備相應(yīng)的設(shè)施和設(shè)備。 3.2 各區(qū)域的設(shè)施和設(shè)備應(yīng)為區(qū)域性，開展特定試驗(yàn)時(shí)應(yīng)根據(jù)要求在相應(yīng)區(qū)域放置設(shè)備。以下是各區(qū)域應(yīng)配備的設(shè)備： 3.2.1 試劑準(zhǔn)備區(qū)：冰箱、潔凈工作臺、離心機(jī)、加樣器、振蕩器、廢棄物容器。 3.2.2 樣品處理區(qū)：冰箱、生物安全柜、離心機(jī)、加樣器、振蕩器、恒溫水浴、上下水設(shè)備、廢棄物容器。 3.2.3 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：冰箱、離心機(jī)、加樣器、電泳儀、振蕩器、恒溫水浴、上下水設(shè)備、廢棄物容器、核酸污染物處理設(shè)備等。 3.2.4 配備-80℃冰箱。 3.3 各區(qū)域應(yīng)備有工作人員的工作服或一次性工作服、帽子和鞋套，必要時(shí)配備防護(hù)眼鏡和/或口罩。 1.1.1 PCR 實(shí)驗(yàn)室基本要求 2.1 PCR 實(shí)驗(yàn)室依據(jù)所使用的方法可分為試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本制備、擴(kuò)增產(chǎn)物分析等三個(gè)區(qū)域。只是使用實(shí)時(shí)熒光PCR儀、HIV病毒載量測定儀的PCR實(shí)驗(yàn)室，有上述前面三個(gè)區(qū)域即可。各區(qū)域應(yīng)*獨(dú)立分隔，不應(yīng)有任何的空氣直通。 2.2 產(chǎn)物分析區(qū)或三個(gè)區(qū)域的zui后一個(gè)區(qū)域（即擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)），空氣流向應(yīng)由室外向室內(nèi)，可通過在室內(nèi)設(shè)置通風(fēng)櫥、排風(fēng)扇或其他排風(fēng)系統(tǒng)達(dá)到空氣流由室外向室內(nèi)流動的要求。 2.3 PCR實(shí)驗(yàn)室各區(qū)域儀器設(shè)備配備通常如下： 2.3.1 試劑準(zhǔn)備區(qū): 儀器設(shè)備主要應(yīng)有加樣器、冰箱、天平、低速離心機(jī)、混勻器、可移動紫外燈等?？墒褂贸瑑艄ぷ髋_作為試劑配制操作臺面。 2.3.2 標(biāo)本制備區(qū) 儀器設(shè)備主要應(yīng)有生物安全柜（為B2, 可避免提取核酸在柜內(nèi)反復(fù)循環(huán)，造成標(biāo)本間交叉“污染”，出現(xiàn)假陽性結(jié)果。此外還應(yīng)配備加樣器、臺式高速離心機(jī)（冷凍及常溫）、臺式低速離心機(jī)、恒溫設(shè)備（水浴和/或干浴儀）、冰箱、混勻器和可移動紫外燈等。 2.3.3 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū) 主要儀器就是核酸擴(kuò)增熱循環(huán)儀（PCR儀，實(shí)時(shí)熒光或普通的）。熱循環(huán)儀的電源應(yīng)，并配備一個(gè)穩(wěn)壓電源或UPS，以防止由于電壓的波動對擴(kuò)增測定的影響。此外，根據(jù)工作需要，還可配備加樣器、超凈臺等。 本區(qū)所使用的儀器設(shè)備可能有加樣器、電泳儀（槽）、電轉(zhuǎn)印儀、雜交爐或雜交箱、水浴箱、DNA測序儀、酶標(biāo)儀和洗板機(jī)等。 建議 在理想情況下，PCR實(shí)驗(yàn)室試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本制備、擴(kuò)增三個(gè)區(qū)域可設(shè)置緩沖間。在緩沖間內(nèi)，可設(shè)置正壓，使室內(nèi)空氣不流向室外，室外空氣不流向室內(nèi)。 標(biāo)準(zhǔn)的PCR實(shí)驗(yàn)室簡介 1、 主體結(jié)構(gòu)： 主體為彩鋼板、鋁合金型材。室內(nèi)所有陰角、陽角均采用鋁合金50內(nèi)圓角鋁，從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。結(jié)構(gòu)牢固，線條簡明，美觀大方，密封性好。 2、 標(biāo)準(zhǔn)的三區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié)： 將PCR過程分成試劑準(zhǔn)備、標(biāo)本制備和PCR擴(kuò)增檢測三個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)區(qū)。整個(gè)區(qū)域有一個(gè)整體緩沖走廊。每個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)區(qū)設(shè)置有緩沖區(qū)， 同時(shí)各區(qū)通過氣壓調(diào)節(jié)，使整個(gè)PCR實(shí)驗(yàn)過程中試劑和標(biāo)本免受氣溶膠的污染并降低擴(kuò)增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。 可打開緩沖區(qū)Ⅰ，緩沖區(qū)Ⅱ和 PCR 擴(kuò)增區(qū)的排風(fēng)扇往外排氣，在實(shí)驗(yàn)區(qū)的外墻上和各 扇門上都安裝有風(fēng)量可調(diào)的回風(fēng)口，空氣通過回風(fēng)口向室內(nèi)換氣。 3、 消毒： 在三個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)和三個(gè)緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內(nèi)部安裝有紫外燈，供消毒用。在試劑準(zhǔn)備區(qū)和標(biāo)本制備區(qū) 還設(shè)置移動紫外線燈，對實(shí)驗(yàn)桌進(jìn)行局部消毒。 4、 機(jī)械連鎖不銹鋼傳遞窗： 試劑和標(biāo)本通過機(jī)械連鎖不銹鋼（不建議使用電子連鎖方式）傳遞窗傳遞，保證試劑和標(biāo)本在傳遞過程中不受污染（人物分流）。 5、 地面 地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面，整體性好。便于進(jìn)行清掃，耐腐蝕。考慮成本也可采用水磨石地面，或大塊的瓷磚（至少800mm×800mm）接縫需要小于2mm。 6、 照明 燈具要選用凈化燈具，能達(dá)到便于清洗、不積塵的特點(diǎn)。 |
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