包被的條件:
Ph9.6碳酸鹽緩沖液;
pH7.2磷酸鹽緩沖液;
Ph7-8 Tris-HCl緩沖液;
加入包被液后,在4-8℃冰箱中放置晝夜,37℃中保溫2小時(shí)。包被濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可能有很大的變化,每批材料需通過(guò)實(shí)驗(yàn)與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定。一般蛋白質(zhì)的包被濃度為10ng/mL-20ug/mL。
封閉:
在包被后,用高濃度的無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過(guò)程。封閉讓大量無(wú)關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙,從而排斥ELISA后步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。
常用的封閉劑:0.05%-0.5%BSA;10%的小牛血清或1%明膠;脫脂奶粉,比較價(jià)廉,可以用高濃度(5%)。
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