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流式細胞術(shù)|實驗技術(shù)服務(wù)

來源:上海拜力生物科技有限公司   2015年05月15日 12:21  

關(guān)鍵詞:流式細胞術(shù)|實驗技術(shù)服務(wù)
簡介:世界*品牌流式細胞術(shù)|實驗技術(shù)服務(wù)原裝,質(zhì)量保證,*。
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測序?qū)嶒灹鞒蹋?br>PI 染色操作步驟
1、將單細胞懸液加入2ml圓底離心管中,離心,1500rpm , 5min,棄上清液。
2、加入PBS 1ml離心洗滌1次,棄上清。
3、加入2ml預冷的70%酒精,4℃固定30min,或是-20℃固定。
4、離心,棄上清液。
5、用1×PBS 1ml洗滌1次,離心。
6、加入RNase A (工作濃度20ug/ml)于500ul 1×PBS中,37℃孵育30min,離心。
7、用1×PBS 1ml洗滌1次,離心。
8、加入PI(工作濃度50ug/ml) 于500ul 1×PBS中,室溫避光孵育30min。
9、混勻,過300目篩網(wǎng),置流式管中, 4℃冰箱保存,待測。
GFP PI染色操作步驟
1、將單細胞懸液加入2ml圓底離心管中,離心,1500rpm , 5min,棄上清液。
2、加入PBS 1ml離心洗滌1次,棄上清。
3、加入2ml預冷PFA,PFA的濃度根據(jù)細胞的特點進行調(diào)節(jié),4℃固定30min。
以下步驟同PI 染色操作步驟的
細胞表面直接免疫熒光染色操作步驟
1、將單細胞懸液加入2ml圓底離心管中,離心,1500rpm,5min,棄上清液。
2、以冷PBA 1ml,離心洗滌,棄上清液。
3、加入用PBA稀釋的熒光素標記的抗體200ul。用微量移液器輕輕吹打混勻,4℃或置冰上孵育30min-1h。
4、離心棄上清液。
5、加入冷PBS1ml,離心洗滌2次,以除去未結(jié)合的多余抗體成分。
6、向細胞中加入冷PBS 500ul,吹打混勻,置流式管中,4℃避光保存,待測。
細胞表面間接免疫熒光染色操作步驟
1-2、同細胞表面直接免疫熒光染色操作步驟
3、 用PBA稀釋的*抗體200ul,對照管加入對應(yīng)于一抗的正常實驗動物IgG,輕輕吹打混勻,4℃或置冰上孵育1.5-2h。離心,棄上清。
4、 BS1ml離心洗滌1次,以去除多余的未結(jié)合的特異性抗體。
5、 PBA適當稀釋的熒光素標記的第二抗體200ul。吹打混勻,4℃或置冰上孵育30min,避光。
6、 PBS 1ml離心洗滌2次。
7、將細胞重新懸浮于500ulPBS中,混勻,置流式管中,避光,4℃冰箱保存,待測。

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