MTT 細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 

    MTT 比色法是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。 MTT 細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑

盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的檢測(cè)。 MTT 檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性 MTT 還原為水不溶性的藍(lán)紫色 Formazan 并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。 在特定溶劑存在的情況下，可以被*溶解。然后通過(guò)酶標(biāo)儀可以測(cè)定 570nm 波長(zhǎng)附近的吸光度。細(xì)胞增殖越多越快，則吸光度越高；細(xì)胞毒性越大，則吸光度越低。 

   MTT 細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒采用了  自主研發(fā) Formazan solvent，使檢測(cè)本底低，靈敏度高，線性范圍寬。 

產(chǎn)品組成： 

自備材料： 

1、 細(xì)胞培養(yǎng)液 

2、 胰蛋白酶消化液 

3、 低速離心機(jī) 

4、 96 孔培養(yǎng)板 

5、 細(xì)胞計(jì)數(shù)板或計(jì)數(shù)器 

6、 細(xì)胞培養(yǎng)箱 

7、 搖床 

8、 顯微鏡 

9、 酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀 

操作步驟(僅供參考)： 

1、 細(xì)胞用含血清的培養(yǎng)液培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期， 常規(guī)胰蛋白酶消化液消化細(xì)胞(懸浮細(xì)胞無(wú)需

    消化)。 

2、 低速離心，收集細(xì)胞沉淀。 

3、 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞沉淀，制備成單細(xì)胞懸液，并計(jì)數(shù)。 

4、 細(xì)胞接種于 96 孔培養(yǎng)板，一般接種密度為 3000～10000 個(gè)細(xì)胞/孔。通常細(xì)胞增殖實(shí)

    驗(yàn)每孔加 3000 個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入 6000 個(gè)細(xì)胞。具體每孔所用的細(xì)胞的

    數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定。 

5、 37℃ 5%CO2 繼續(xù)培養(yǎng)或按照實(shí)驗(yàn)具體需要進(jìn)行培養(yǎng)，一般培養(yǎng) 6～24h。 

按照實(shí)驗(yàn)具體要求，給予 0～20ml 干預(yù)藥物處理，37℃ 5%CO2 繼續(xù)培養(yǎng)至合適時(shí)間。

7、 棄培養(yǎng)液，每孔加入 10ml MTT solution 和 100ml 新鮮培養(yǎng)液，在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)

    孵育 4h。 

8、 棄培養(yǎng)液，每孔加入 110ml Formazan solvent，置搖床上低速振蕩 10 min，使結(jié)晶物

    充分溶解。 如果紫色結(jié)晶較小或較少， 溶解的時(shí)間會(huì)短一些。 如果紫色結(jié)晶較大或較多，

    溶解的時(shí)間會(huì)長(zhǎng)一些。 

9、 在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀 570nm 測(cè)定 各孔吸光度。 

注意事項(xiàng)： 

1、 MTT solution 盡量減少反復(fù)凍融的次數(shù)，當(dāng)顏色變?yōu)榛揖G色時(shí)，請(qǐng)勿使用。 

2、 由于使用 96 孔板進(jìn)行檢測(cè)，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，應(yīng)注意蒸發(fā)問(wèn)題。 

3、 MTT solution 在低溫情況下會(huì)凝固，置于室溫或 20～25℃水浴至全部融解后使用。 

4、 Formazan solvent 可以-20℃儲(chǔ)存，當(dāng)產(chǎn)生沉淀或凝固時(shí)可以 37℃水浴孵育以促進(jìn)溶

解，并且必須在全部溶解并混勻后使用。 

5、 觀察 formazan 是否*溶解，亦可以借助 光學(xué)顯微鏡觀察。 

6、 培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)盡量細(xì)菌避免污染。 

7、 應(yīng)注意設(shè)立 OD 調(diào)零孔和對(duì)照。 

8、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 

有效期： 12 個(gè)月有效。