RNA轉(zhuǎn)錄物能通過瓊脂糖變性膠電泳檢測其探針完整性。標(biāo)記效果可通過抗DIG堿性磷酸酶直接檢測，有兩種方法可以選擇。
 
方法一、用標(biāo)準(zhǔn)DIG測試條比較鑒定
 
使用測試條鑒定包括兩個(gè)步驟：首先，將轉(zhuǎn)錄標(biāo)記的RNA稀釋成一系列的濃度，并點(diǎn)樣到空白測試條上（對(duì)照測試條已用一系列濃度點(diǎn)樣）；其次，將點(diǎn)樣的備測試條與對(duì)照測試條一起進(jìn)行免疫、顯色反應(yīng)，然后根據(jù)對(duì)照測試條計(jì)算備測樣品的濃度。
 
1.  將轉(zhuǎn)錄反應(yīng)物稀釋成濃度約為1 μg/ml，即取前述轉(zhuǎn)錄標(biāo)記物1 μl 加入99 μl RNA稀釋緩沖液，如果轉(zhuǎn)錄標(biāo)記反應(yīng)正常其濃度應(yīng)大約為1 μg/ml。
2.  取5支Eppendorf管，按A、B、C、D、E順序編號(hào)，將1 μg/ml 濃度的RNA標(biāo)記物按下列方式稀釋成一系列濃度：
 
編號(hào)    RNA標(biāo)記物稀釋方法    RNA終濃度
A    1 μg/mlRNA 10 μl＋RNA稀釋緩沖液23 μl    300 pg/μl
B    1 μg/mlRNA 5 μl + RNA稀釋緩沖液45 μl    100 pg/μl
C    A 5 μl + RNA稀釋緩沖液45 μl    30 pg/μl
D    B 5 μl + RNA稀釋緩沖液45 μl    10 pg/μl
E    C5 μl + RNA稀釋緩沖液45 μl    3 pg/μl
 
3.  將空白測試條置于一聚酯膜上，以每一濃度1 μl 的量在測試條上點(diǎn)樣，在聚酯膜上做好點(diǎn)樣濃度標(biāo)記，切勿直接在測試條上做任何記號(hào)，切勿用手接觸測試條。
4.  室溫干燥約2 min，同時(shí)制備測試溶液。
5.  在2ml封閉液中加入1 μl Anti-DIG-AP。
6.  顯色底物溶液：在2 m l檢測緩沖液中加入9 μl NBT溶液和7 μl BCIP溶液。
7.  準(zhǔn)備5個(gè)樣品池（2.5 ~ 5 ml 容量），1~6順序編號(hào)，依次加入2 ml 以下溶液。
（1）封閉液；
（2）抗體溶液（第5項(xiàng)）；
（3）③④⑤洗膜緩沖液；
（4）檢測緩沖液；
（5）顯色底物溶液（第6項(xiàng)）。
8．將樣品測試條和對(duì)照測試條按下列順序在上述準(zhǔn)備的溶液中浸漬處理，兩步驟直接讓多余的溶液滴在吸水紙上。
（1）封閉， 2 min。
（2）抗體結(jié)合， 3 min。
（3）封閉，1 min。
（4）洗膜，1 min。
（5）平衡，1 min。
（6）顯色反應(yīng)（黑暗），5~30 min。
9．顯色反應(yīng)30 min，即停止反應(yīng)（延長顯色反應(yīng)時(shí)間，會(huì)增加背景而影響結(jié)果比較），用水漂洗測試條，將其置于3 MM Whatman濾紙上空氣干燥，然后在光下檢測。
 
結(jié)果評(píng)估
顯色反應(yīng)進(jìn)行5~10 min時(shí)，對(duì)照測試條中300 pg 濃度的樣點(diǎn)即會(huì)出現(xiàn)顏色，30 min時(shí)3 pg 的樣點(diǎn)也可見顏色，隨即停止顏色反應(yīng)。漂洗后比較對(duì)照與待測樣品顏色，根據(jù)對(duì)照濃度與待測樣品的稀釋濃度計(jì)算標(biāo)記物的數(shù)量。如果標(biāo)記物濃度低于10~30 pg 則不適宜采用這一快速檢測方法。
 
方法二、用DIG標(biāo)記的RNA對(duì)照比較檢測
 
1.  將DIG標(biāo)記的對(duì)照RNA先稀釋成20 ng/μl（5 μl 對(duì)照RNA加入20 μl DEPC-H2O），取5支Eppendorf管以A、B、C、D、E、F順序編號(hào)，將對(duì)照按下列比例稀釋成一系列濃度：
 
編號(hào)    對(duì)照RNA稀釋方法     終濃度
A    20 ng/μl RNA 2 μl＋RNA稀釋緩沖液38 μl    1 ng/μl
B    A 5 μl＋RNA稀釋緩沖液45 μl    100 pg/μl
C    B 5 μl＋RNA稀釋緩沖液45 μl     10 pg/μl
D    C 5 μl＋RNA稀釋緩沖液45 μl     1 pg/μl
E    D 5 μl＋RNA稀釋緩沖液45 μl     0.1 pg/μl
F    E 5 μl＋RNA稀釋緩沖液45 μl    0.01 pg/μl
2.  按照同樣的方法將待測的DIG－RNA也稀釋成一系列濃度，編號(hào)用1、2、3、4、5、6以便于與對(duì)照區(qū)別。
3.  取一片尼龍膜，按照前述方法一的方法點(diǎn)樣，*排點(diǎn)對(duì)照，第二排點(diǎn)待測樣，不必從濃度A開始，只需點(diǎn)C~F濃度進(jìn)行檢測。
4.  用UV交聯(lián)方法或尼龍膜也可采用120℃烘膜30 min 的方法使RNA固定于膜上，再用洗膜緩沖液洗膜幾秒種。
5.  將膜置于封閉液中，室溫下封閉30 min。
6.  準(zhǔn)備抗體溶液：用封閉液按1∶5000的比例稀釋Anti-DIG-AP。
7.  將膜置于抗體溶液中，室溫下保持30 min，注意抗體溶液必須沒過膜。
8.  室溫下用洗膜緩沖液洗膜2次，每次15 min。
9.  再將膜置于檢測緩沖液中2 min。
10.  在10 ml 檢測緩沖液中加入45 μl NBT和35 μl BCIP配制成顯色底物溶液（現(xiàn)配現(xiàn)用）。
11.  除去檢測緩沖液，加入顯色底物溶液，在黑暗下顯色大約16小時(shí)（一般幾分鐘即可見開始顯色），注意在顯色過程中，切勿振蕩樣品盤。
12.  當(dāng)顏色沉淀充分后，停止顯色反應(yīng)，用TE緩沖液或無菌水洗膜5 min。
13.  比較對(duì)照和樣品的顏色測算濃度。